大鼠白细胞介素10(IL-10)elisa试剂盒

                                             大鼠白细胞介素10(IL-10)elisa试剂盒
1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠IL-10同源二聚体。预包被抗大鼠IL-10单抗（识别α螺旋结构域）捕获样本中的IL-10，生物素标记的二抗（识别不同表位）与链霉亲和素-HRP系统催化TMB显色，450nm吸光度值与IL-10浓度正相关。

 2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高结合力（Kd=0.15nM）

重组标准品  0-1000pg/mL  -20℃  冻干粉，比活性≥1×10 IU/mg

生物素-抗体  120μL  -20℃（避光）  识别β折叠区

免疫细胞激活剂  1mL  -20℃  LPS（1mg/mL）+ConA（0.5mg/mL）

血清基质液  15mL  4℃  消除基质效应

3. 性能参数

检测范围：7.8-500pg/mL（可扩展至2000pg/mL）

灵敏度：3.1pg/mL（基于3倍空白SD）

样本兼容性：

最佳：巨噬细胞上清（RAW264.7）

适用：血清（需1:5稀释）、脑脊液、脾脏匀浆

交叉反应：

大鼠IL-10：100%

小鼠IL-10：85%

人IL-10：<0.01%

精密度：

批内CV：3.8-5.2%

批间CV：6.5-8.7%

4. 样本处理方案

4.1 细胞上清制备

腹腔巨噬细胞分离（5%淀粉诱导）

LPS（100ng/mL）刺激24小时

离心（300×g，10分钟）去除细胞碎片

4.2 组织处理

脾脏匀浆：1:9（w/v）含蛋白酶抑制剂的PBS

脑组织：去除脑膜后低温匀浆

4.3 保存要求

短期：4℃保存≤48小时

长期：-80℃分装（避免＞3次冻融）

冻干标准品：复溶后-20℃保存≤1个月

5. 标准化操作流程

预实验准备

标准品梯度：0、7.8、15.6、31.2、62.5、125、250、500pg/mL

样本预处理：血清用基质液1:5稀释

关键步骤

孵育条件：37℃恒温摇床（150rpm）

洗板程序：自动洗板机（350μL/孔×5次）

显色控制：室温避光精确12分钟

质控标准

空白孔OD值：≤0.08

最低检测限回收率：90-110%

标准曲线R2值：≥0.995

6. 主要应用方向

抗炎机制研究：调节性T细胞功能验证

神经炎症：脑缺血再灌注损伤模型

自身免疫病：EAE模型免疫调节

7. 注意事项

实验设计

推荐采样时间：免疫刺激后6-24小时

阳性对照：LPS激活的巨噬细胞上清

干扰控制

避免使用溶血样本（Hb>0.5mg/mL）

高脂样本需超速离心（10000×g，15分钟）

数据分析

推荐使用四参数logistic曲线拟合

异常值剔除标准：超出均值±3SD

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