人多能干细胞分化培养基

                                           人多能干细胞分化培养基

产品基本信息

产品简介

人多能干细胞分化培养基是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell^TM）研发的一款适用于人多能干细胞诱导分化的培养基。该培养基可用于EB（拟胚体）的形成。拟胚体是人多能干细胞在悬浮培养条件下形成的球状结构，可用于细胞多能性检测，形成拟胚体可验证细胞分化潜能。

产品特性

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• 诱导人多能干细胞（ES/iPS）形成拟胚体

产品内容

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操作方法

实验准备

人多能干细胞分化培养基配制：

1.1 在2-8℃解冻人多能干细胞分化添加剂，轻晃摇匀；

1.2 随后将添加剂加入到人类多能干细胞分化基础培养基中（每10mL添加剂与500mL分化基础培养基彻底混合）混匀即为人多能干细胞分化培养基（AC-1001002）。人多能干细胞分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。

注意：

1. 人多能干细胞分化添加剂只能在2-8℃解冻，可按实际用量对添加剂进行分装，分装后立即使用或储存于-20℃至-80℃保存。

2. 人多能干细胞分化培养基使用前建议在室温平衡10-20min，不建议在37℃加热。

实验操作(以6孔板为例)

2.1 在显微镜下观察人多能干细胞，确认细胞汇合度达到70–80%，准备传代。

2.2 清洗：拿出培养板,吸掉原有培养基，沿培养皿边缘缓慢加入37℃预热PBS缓冲液，轻轻晃动冲洗，然后吸去PBS缓冲液；

2.3 消化：在培养板中加入1.5mL人多能干细胞无酶消化液（AC-1001008）使之覆盖皿

底，并置于37℃，5%CO₂培养箱中孵育2~5 min；

2.4  吹打：吸掉人多能干细胞消化液（AC-1001008）后，立刻加入室温平衡好的人

多能干细胞分化培养基，用移液枪扇形吹打培养皿底，吹打次数保持在

3~5次，使皿底贴附的干细胞集落脱落，轻柔缓慢吹吸混匀，制成干细胞悬液；

注意：吹吸皿底细胞的力度要轻柔，吹打脱落和吹吸混匀的次数在3~5次为宜，尽量避免形成单细胞。如有少量细胞无法从皿底脱落，属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落，需延长消化时间。

3.5制备拟胚体

3.5.1悬滴培养法制备拟胚体

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• 稀释：将细胞悬液稀释，细胞密度约为1-2×10⁵cells/mL；

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• 制备悬滴：将稀释好的细胞悬液以30-50uL/滴(3000-7000 cells/滴),均匀接种在培养皿皿盖内面，翻转培养皿盖将其扣回加有PBS的培养皿上（加入PBS防止悬滴蒸发），放入37℃，5%CO₂箱中培养；

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• 3-4天后，非贴壁型培养皿中预先加入人多能干细胞分化培养基，将培养皿盖上的悬滴转移至培养皿中（6cm培养皿加入3-4mL培养基)中，可观察到明显的拟胚体结构，轻轻晃动培养皿使拟胚体均匀分布在培养皿中继续培养。

3.5.2悬浮培养法制备拟胚体  

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• 稀释：将细胞悬液稀释，细胞密度约为2-5×10⁵cells/mL；

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• 接种：将稀释好的细胞悬液接种至非贴壁型培养皿内。

3.6换液

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• 换液频率：使用悬滴法制备拟胚体,将悬滴接入非贴壁型培养皿继续培养后，每2-3天换一次液；使用悬浮培养法制备拟胚体，大约在第3天形成明显的拟胚体结构，可进行初次换液，后续每2-3天换一次液;

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• 换液方法：将需换液的拟胚体悬液转移至15mL/50mL离心管中，静置约3min,待拟胚体沉降至管底，吸掉上清，加入室温平衡好的人多能干细胞分化培养基，用巴士滴管轻轻转移至非贴壁型培养皿中，轻轻晃动培养皿使之均匀分布在培养皿中，37℃，5%CO₂培养箱中继续培养。                 

质量控制