人多能干细胞分化培养基AC-1001002

人多能干细胞分化培养基

一、产品基本信息

 二、产品简介

人多能干细胞分化培养基是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell^®）研发的一款适用于人多能干细胞诱导分化的培养基。该培养基可用于 EB（拟胚体）的形成。拟胚体是人多能干细胞在悬浮培养条件下形成的球状结构，可用于细胞多能性检测，形成拟胚体可验证细胞分化潜能。

三、产品特性

l 诱导人多能干细胞（ES/iPS）形成拟胚体

 四、产品内容

五、相关产品

人 多 能 干 细 胞 培 养 基 （Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001000） Advance 人多能干细胞培养基（Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001001） 人多能干细胞分化培养基（Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001002）

人多能干细胞消化液（Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001008）

即用型基质胶（Applied Cell^®: Cat. no.AC-1001007）

 六、操作方法实验准备

1. 人多能干细胞分化培养基配制：

1.1. 在 2-8℃解冻人多能干细胞分化添加剂，轻晃摇匀；

1.2. 随后将添加剂加入到人类多能干细胞分化基础培养基中（每 10mL 添加剂与 500mL 分化基础培养基彻底混合）混匀即为人多能干细胞分化培养基（AC-1001002）。人多能干细胞分化培养基    可在 2-8℃稳定储存 2-3 周。

注意：人多能干细胞分化添加剂只能在 2-8℃解冻，可按实际用量对添加剂进行分装，分装后立即使用或储存于-20℃至-80℃保存。

1.3. 人多能干细胞分化培养基使用前建议在室温平衡 10-20min，不建议在 37℃加热。

 七、实验操作(以 6 孔板为例)

1. 在显微镜下观察人多能干细胞，确认细胞汇合度达到 70–80%，准备传代。

2. 清洗：拿出培养板,吸掉原有培养基，沿培养皿边缘缓慢加入 37℃预热 PBS 缓冲液，轻轻晃动冲洗， 然后吸去 PBS 缓冲液；

3. 消化：在培养板中加入 1.5mL 人多能干细胞消化液（AC-1001008）使之覆盖皿底，并置于 37℃， 5%CO2 培养箱中孵育 2~5 min；

4.  吹打：吸掉人多能干细胞消化液（AC-1001008）后，立刻加入室温平衡好的人多能干细胞分化培     养基，用移液枪扇形吹打培养皿底，吹打次数保持在 3~5 次，使皿底贴附的干细胞集落脱落，轻柔缓慢吹吸混匀，制成干细胞悬液；

注意：吹吸皿底细胞的力度要轻柔，吹打脱落和吹吸混匀的次数在 3~5 次为宜，尽量避免形成单细胞。如有少量细胞无法从皿底脱落，属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落，需延长消化时间。

5. 制备拟胚体

5.1. 悬滴培养法制备拟胚体

稀释：将细胞悬液稀释，细胞密度约为 1-2×105cells/mL；

 制备悬滴：将稀释好的细胞悬液以 30-50uL/滴(3000-7000 cells/滴),均匀接种在培养皿皿盖内面， 翻转培养皿盖将其扣回加有 PBS 的培养皿上（加入 PBS 防止悬滴蒸发），放入 37℃，5%CO2 箱中培养；3-4 天后，非贴壁型培养皿中预先加入人多能干细胞分化培养基，将培养皿盖上的悬滴转移至培养皿中（6cm 培养皿加入 3-4mL 培养基)中，可观察到明显的拟胚体结构，轻轻晃动培养皿使拟胚体均匀分布在培养皿中继续培养。

 5.2. 悬浮培养法制备拟胚体

A. 稀释：将细胞悬液稀释，细胞密度约为 2-5×10⁵cells/mL； B.接种：将稀释好的细胞悬液接种至非贴壁型培养皿内。

5.3. 换液

A. 换液频率：使用悬滴法制备拟胚体,将悬滴接入非贴壁型培养皿继续培养后，每 2-3 天换一次液；

使用悬浮培养法制备拟胚体，大约在第 3 天形成明显的拟胚体结构，可进行初次换液，后续每 2-3 天换一次液;

B. 换液方法：将需换液的拟胚体悬液转移至 15mL/50mL 离心管中，静置约 3min,待拟胚体沉降至管底，吸掉上清，加入室温平衡好的人多能干细胞分化培养基，用巴士滴管轻轻转移至非贴壁型培养皿中，轻轻晃动培养皿使之均匀分布在培养皿中，37℃，5%CO2 培养箱中继续培养。

 八、拟胚体形态图

拟胚体形态图

九、质量控制