TDT末端转移酶

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase（末端脱氧核苷酸转移酶，TdT）是一种模板非依赖型DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸重复添加到寡核苷酸、单链和双链DNA的3'羟基端。TdT反应需要含有至少3个碱基的短序列作为引物。以RNA为模板时，TdT性能严格依赖于受体RNA 3’-末端的三级结构和核苷酸的种类。一般TdT对RNA模板的作用效率比DNA模板低。

应用

合成同聚物和杂聚物；线性双链DNA的3’-OH末端同聚物加尾；寡聚脱氧核苷酸和DNA标记；5’-RACE(快速扩增cDNA末端)；凋亡反应的原位定位。

来源

大肠杆菌细胞，含有编码牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶的基因。

单位定义

37℃，60 min内将1 nmol脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制

相关测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。

抑制与失活

抑制剂：金属螯合剂、铵、氯化物、碘化物和磷酸盐离子。

失活：加入EDTA，70℃加热10 min。