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抗氧化/自由基检测

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北京 更新日期：2024-04-11

北京嘉美臻元生物技术有限公司

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产品详情:

中文名称：
抗氧化/自由基检测
产品类别：
技术服务 免疫生化实验

抗氧化/自由基检测



 
在抗氧化研究中，自由基的检测已成为至关重要的一环，得到了广泛的应用。自由基，化学上也称为“游离基”，是指化合物的分子在光热等外界条件下，共价键发生均裂而形成的具有不成对电子的原子或基团。自由基检测的方法多种多样，包括自由基相关酶的测定，化学发光测定，吸光度法等。抗氧化活性的检测方法与被测物的性质、组成和检测体系等因素密切相关。抗氧化活性的检测模式主要有：1.测量底物（标记底物）或产物的量的变化；2.测量氧化反应的速率；3.测量特征自由基变化的速度或程度；4.测量被测物的抑制率；5.测量被测物产生与标准抗氧化剂同等作用的浓度。

 

一、对超氧阴离子的清除作用
1、利用邻苯三酚自氧化体系测定样品对超氧阴离子的清除作用。

取50 mmol·L-1的Tris-HCI缓冲液3 mL (pH=8.2，含有2 mmol·L-1的Na2EDTA)，加入l mL待检样品，于25℃保温10 min，然后加入25 ℃预温的5 mmol·L-1的邻苯三酚0.3 mL(预先用10 mmol·L-1的盐酸配制)，精确反应4 min，用0.5 mL浓盐酸终止反应，测定其在320 nm下的吸光度。以10 mmol·L-1的盐酸作为空白调零，按如下公式计算清除率： 
式中A对照为未加待检样品的邻苯三酚反应体系的吸光度（用1mL 10 mmol·L-1的盐酸替代样品）；A样品为加入待检样品后的邻苯三酚反应体系的吸光度；A样品空白为加入待检样品后的无邻苯三酚的反应体系的吸光度（用0.3mL 10 mmol·L-1的盐酸替代邻苯三酚溶液）。 

2、注意事项
  1）所用的两个比色皿杯子必须是石英的，上面会写着“Q”,或“S”，不得使用玻璃的，玻璃比色皿要么什么都不写，要么写着 “G”。 
  2）测定前要用100g砝码和天平标定所用的移液枪插上枪头后是否精准，要求误差不超过5‰，不是5％。 
  3）测定大量数据前，使用者先配制10g/L的Vc，做三个平行测定，精准度达到5%以内再开始正确的测定。
  4）测定时由于每个人有使用习惯和误差，中间不得换人换枪。

二、对DPPH·的清除作用 
1、样品遇酒精不浑浊的操作
DPPH·溶液的配制：取待检样品l mL与120μmol·L-1的DPPH·溶液3 mL加入同一试管中，摇匀，在黑暗中放置30 min，以无水乙醇为空白，在517 nm下测定其吸光度，并按下式计算清除率：
式中A对照为未加待检样品的DPPH·反应体系的吸光度(用1mL无水乙醇补充体积)；A 样品 为加入待检样品后的DPPH·反应体系的吸光度；A 样品空白 为加入待检 样品后的无DPPH·的反应体系的吸光度（用3mL无水乙醇补充体积）。 

注意事项：实验所用的两个比色皿杯子可以石英也可是是玻璃的，但是两个比色皿要一致。石英的，上面会写着“Q”,或“S”；玻璃比色皿要么什么都不写，要么写着 “G”。 准确称取47 mg DPPH·，用无水乙醇溶解并定容至100 mL，避光保存(0～4℃)，使用时稀释至120 μmol·L-1。

2、样品遇到酒精大量浑浊的操作
DPPH·溶液的配制：准确称取47 mg DPPH·，用无水乙醇溶解并定容至100 mL，避光保存(0～4℃)，使用时稀释至120 μmol·L-1。取待检样品l mL与120μmol·L-1的DPPH·溶液3 mL加入同一试管中，摇匀，在黑暗中放置30 min，以纯水为空白，在517 nm下测定其吸光度，并按下式计算清除率：
式中A对照 为未加待检样品的DPPH·反应体系的吸光度(用1mL纯水补充体 积)；A 样品 为加入待检样品后的DPPH·反应体系的吸光度；A样品空白 为加入待检样 品后的无DPPH·的反应体系的吸光度（用3mL纯水补充体积）。
 
三、对羟自由基的清除作用
利用H2O2与Fe2+混合产生•OH，在体系中加入水杨酸捕捉•OH并产生有色物质，该物质在510nm下有吸收。反应体系中含8.8mmol/L H2O2 1mL、9mmol/L FeSO4 1mL、9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液1mL，不同浓度的样品溶液1mL。最后加H2O2启动反应，37℃反应30min，以蒸馏水为参比，在510nm下测定各浓度的吸光度。考虑到样品本身的吸光值，以9mmol/L FeSO4 1mL、9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液1mL，不同浓度的样品溶液1mL和1mL蒸馏水作为样品的本底吸收值。按下式计算•OH清除率：
A0—空白对照液的吸光度； 
Ax—加入样品溶液后的吸光度； 
Ax0—不加显色剂H2O2样品溶液本底的吸光度。
 
四、总还原能力的测定
在10mL离心管中分别加入0.2mol/L pH 6.6的磷酸缓冲液2.5mL和不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液1mL，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃反应20min。取出后加入2.5mL 10%三氯乙酸终止反应，5000r/min离心10min。取上清液2.5mL，加入2.5mL蒸馏水和0.5mL FeCl3，混匀后静置10min，在700nm处检测吸光值。Vc作为阳性对照。 

五、对Fe2+离子螯合能力的测定
分别取1mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液和3.7mL蒸馏水，加入2mmol/L的FeCl2溶液0.1mL和5mmol/L的菲洛嗪溶液0.2mL，25℃水浴10min，于562nm处测吸光值。EDTA为阳性对照。样品对Fe2+的螯合率计算公式如下：
A0—1mL蒸馏水代替反应体系中样品溶液后的吸光值； 
A1—样品溶液反应后的吸光值； 
A2—0.1mL的蒸馏水代替反应体系中FeCl2溶液后的吸光值。
抗氧化自由基检测_

公司简介

北京嘉美臻元生物技术有限公司（嘉美实验）是一家专注于生命科学领域的高科技企业，公司创立于2005年，由在国内科研试剂、实验技术、质量管理领域有着十几年从业经验的专业、专家团队组建而成；2009年在北京重组，先后成立了北京嘉美诺斯生物科技有限公司（主要开展生物相关产品进、出口业务），北京嘉美纽诺生物科技有限公司（主要为大型药厂、诊断试剂公司提供服务）。为方便实验服务项目开展，成立了北京嘉美臻元生物技术有限公司，以“嘉美实验”品牌提供实验外包服务。近五年来，公司已为全国各类科研用户提供了近5000个大大小小的专项实验外包或整体课题外包项目服务，实验项目涵盖了生命科学、医学的各研究领域。经过多年努力，公司已成为

成立日期 (9年)
注册资本 100.000000万人民币
员工人数 50-100人
年营业额 ￥ 100万-300万
经营模式 服务
主营行业 生化试剂,细胞培养,微生物学,细胞生物学,免疫安全

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