全血MICRORNA提取试剂盒

我公司的全血microRNA(miRNA)提取试剂盒提取小RNA(＜200nt)具有操作步骤简单、重复性、产率较高的特点。核酸提取的成功与否、提取质量的好坏对后续实验起着至关重要的作用。使用TRIzol试剂提取总RNA，对总RNA中包含的部分小RNA进行研究，该方法的缺点是总RNA中microRNA的比例较小，同时由于mRNA的干扰，会导致后续反转录和RealTime PCR实验效率很低，很难获得理想的实验结果，且结果不可靠。Biorab在探索miRNA分子功能的过程中开发的全血miRNA提取试剂盒，通过一步上柱即可获得纯度高达98%的不含大RNA的miRNA，而且可在45分钟内完成小RNA的提取。该miRNA提取试剂盒广泛适用于冻存和新鲜的抗凝全血样本（不适用于血清和血浆），每150μl全血可获得~1μg的microRNA。

产品组成：

储存：室温可保存2年。
自备试剂：异丙醇、乙醇、75%异丙醇
注意：miRNA Reagent A溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。

操作方法：
1．向1.5ml EP管中加入300μl miRNA Reagent A。将150μl 抗凝全血加入到上述300μl miRNA Reagent A中，立即手腕用力震荡混合均匀。室温静置 5分钟 以充分裂解细胞。
2．向上述裂解完毕的裂解液中加入250μl miRNA Reagent B，上下颠倒混合均匀。13000rpm离心5分钟，吸取550μl上清液，转移到新的1.5ml EP管中。
3．向上述溶液中加入200μl无水乙醇，手腕用力震荡数次，室温放置 5分钟。
4．13000rpm离心10分钟，转移700μl上清液到新的1.5mlEP管中。
5．向上述溶液中加入300μl 异丙醇，手腕用力上下颠倒数次。
6．分两次将上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
7．向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇洗涤一次，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
8．向吸附柱中加入500μl无水乙醇洗涤一次，13000rpm离心1分钟，倒掉过滤液。
9．吸附柱 13000rpm 空离心2分钟，去掉残留的乙醇。
10．将吸附柱放入到新 1.5ml EP管中，室温放置 2分钟，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μl RnaseFree TE Buffer，室温静置 2分钟，13000rpm离心2分钟，洗脱产物即为提取的miRNA。（通常取3～5μl该产物，即可使用我司TaqMan miRNA 反转录试剂盒进行反转录反应，货号：MT0006）。


图例：应用全血miRNA提取试剂盒（MT0002）提取全血的microRNA。
 泳道1-3：-80℃冻存一年的全血；
 泳道4-6：新鲜抗凝全血。


常见问题：
1．本方法提取的小 RNA，95％以上为小 RNA（<200nt），有时会残留一些>200nt的RNA，通常残留的>200nt RNA不影响后续试验操作。
2．本试剂盒提取的小 RNA 由于不含 mRNA 等大分子量的RNA，因此更适合做后续反转录试验，从而进行定量试验。
3．使用本试剂盒提取的microRNA 浓度通常在50ng/μl 左右，取5～10μl即可用于电泳检测。取3~5μl即可用于我司TaqMan miRNA 反转录试剂盒进行反转录反应（货号：MT0006），通常使用我司优化的miRNA-TaqMan RealTime PCR技术（货号：MTTxxxxx）。