TAQMAN MICRORNA反转录试剂盒

TaqMan miRNA反转录试剂盒采用加A法进行反转录，加A法的反转录效率远高于茎环法，因此，采用该方法可极大的提高检测灵敏度。该试剂盒操作简单，仅需要两步即可轻松完成miRNA的cDNA合成，合成的cDNA可用于所有miRNA的后续定量检测。TaqMan miRNA反转录试剂盒专用于miRNAs分子的反转录试验，转录获得的cDNA产物用于TaqMan定量PCR方法检测miRNAs分子（仅适用于Biorab TaqMan miRNA定量PCR试剂盒，货号：MTTxxxxx）。


TaqMan miRNA反转录试剂盒原理图

产品组成：

储存：请置于-20℃，可保存2年；避免反复冻融。

操作方法：
1．按以下组分在0.2ml EP管中配制应液：
  miRNA（5～100 ng/μl）————————————4μl
  5×TaqMan miRNA RT Solution A—————————1μl注意：不建议使用Total RNA，Total RNA 试验结果通常差于miRNA。
2．在PCR 仪上按以下条件进行加 A 反应：
  37℃———————30分钟
  85℃———————5分钟
3．反应完毕后，在上述5μl 反应体系中加入如下试剂，并混合均匀。
  10×TaqMan miRNA RT Primer—————————2μl
  10×TaqMan miRNA RT Solution B———————2μl
  H2O————————————————————11μl
4．在PCR 仪上按以下条件进行反转录反应:
  30℃———————5分钟
  55℃———————60min
  95℃———————5分钟
获得的cDNA 产物可用于多个目标 miRNA的检测。反转录完毕后获得的miRNA cDNA，可加入20～80μl ddH20 稀释2～5 倍，通常取2μl即可用于 TaqMan miRNA 定量 PCR 试剂盒检测(货号：MTTxxxxx，该试剂盒有一万余种，详细列表可查询 TaqMan miRNA qPCR kit.xls)。
5．利用TaqMan qPCR Kit 对上述miRNA cDNA 产物进行 RealTime PCR 检测。