产品名称 | 猪脑微血管内皮细胞 | 组织来源 | 脑组织 |
英文名称 | Porcine Brain Microvascular Endothelial Cells | 种属 | 猪 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3544 |
方法简介 实验室分离的猪脑微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的猪脑微血管内皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 猪脑微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
猪脑微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：8-10月龄微型猪，体重18-25kg，每只可分离1.8-3.8×10⁶个目标细胞，活力>87%
试剂：胶原酶Type IV、Dispase、胰蛋白酶、FBS、MCDB-131培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入胶原酶Type IV、Dispase、胰蛋白酶、FBS37℃消化30-60分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁后呈典型的铺路石样形态，细胞间连接紧密，第5-7天可达到高密度单层
常见问题优化
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
大鼠镁螯合酶(Mg-chelatase)elisa试剂盒 | MT-4 (STR)人急性淋巴母细胞 |
大鼠混合功能氧化酶(MFO)elisa试剂盒 | NCI-H820非小细胞肺 |
大鼠线粒体融合素1(MFN1)elisa试剂盒 | NCI-H1650非小细胞肺 |
大鼠微纤丝关联蛋白4(MFAP4)elisa试剂盒 | LC-1/sq-SF非小细胞肺 |
大鼠缓激肽(BK)elisa试剂盒 | HCC-1195非小细胞肺 |
大鼠缓慢激活的延迟整流钾通道(IKs)elisa试剂盒 | SNU-878肝 |
小鼠粘液醣蛋白（MG）elisa试剂盒 | NCI-H1869非小细胞肺 |
BRL-3A大鼠肝细胞专用培养基 | CRPPA基因过表达细胞株 |
MEF小鼠胚胎成纤维细胞专用培养基 | ABCB7基因过表达细胞株 |
兔原代输尿管成纤维细胞专用培养基 | ANKS4B基因过表达细胞株 |
CBRH7919细胞专用培养基 | DNAI2基因过表达细胞株 |
人原代肺泡巨噬细胞专用培养基 | CYP27C1基因过表达细胞株 |
猪脑微血管内皮细胞大鼠原代肠神经胶质细胞专用培养基 | PCDHB1基因过表达细胞株 |
ChaGo-K-1细胞专用培养基 | ARHGEF39基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷Hanks液、Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶混合消化液、Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康巴马小型猪（15-20kg），氯胺酮联合阿托品肌注麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 过量麻醉剂心脏采血后处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取脑组织，冰预冷Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，38.5℃水浴消化27min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 38.5℃、5% CO2培养，每3天换液一次，定期倒置显微镜观察多突起状，贴壁生长，可见神经突延伸及生长情况。
