人脑微血管内皮细胞 新品

细胞简介：

人脑微血管内皮分离自脑组织；脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，它是组成脑微血管腔面单层扁平上皮样细胞，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑，大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在脑血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。其主要特征如下：①脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；②脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；③脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生“两极分化”的表现型。

产品信息:

产品名称 人脑微血管内皮细胞

组织来源 脑组织

默认种属 人

产品规格 5×10^5Cells/T25

方法简介 公司实验室分离的人脑微血管内皮采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测 公司实验室分离的人脑微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

人脑微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞培养步骤：

组织块培养法

取材与剪切

在无菌条件下取出组织，用Hanks液或PBS清洗，去除血污和脂肪、结缔组织等非目标成分。

用眼科剪将组织剪切成 0.5-1 mm³ 的小块。

接种

用吸管将组织块均匀地贴附在培养皿或培养瓶的内表面，各组织块之间保持一定间距（约0.5 cm）。

吸去多余液体，将培养器皿翻转，放入 37℃、5% CO₂ 的培养箱中，静置 1-3小时，让组织块牢固贴壁。

加液培养

待组织块贴壁后，轻轻翻转培养瓶，从一侧缓慢加入足量的培养液，使组织块浸没在液体中，注意不要让液体直接冲击组织块，以免冲起。

继续在培养箱中静置培养。通常 3-5天 后可观察到细胞从组织块边缘长出。

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无菌操作是生命线：所有操作必须在生物安全柜内严格无菌进行，使用专用试剂和耗材，防止交叉污染。

消化是关键步骤：

控制时间：使用胰蛋白酶或TrypLE Express消化时，严格控制在1-2分钟内。显微镜下观察到细胞变圆、边缘松动即可终止，避免过度消化导致细胞损伤。

消化液选择：部分供应商推荐使用0.25%胰蛋白酶，也有使用TrypLE Express或0.25% EDTA胰酶的，可根据实验室条件和细胞反应选择。

培养基与生长因子：

基础培养基：推荐使用专用培养基（如EGM-2 MV BulletKit）。若使用DMEM/F12等基础培养基，需补充10-20%胎牛血清（FBS）及抗生素（如青霉素/链霉素）。

生长因子：为促进生长，可添加VEGF、FGF等内皮细胞生长因子。传代后可尝试对比培养（一瓶用原装完全培养基，一瓶用自配培养基）。

细胞密度与传代：

最佳传代密度：建议在细胞汇合度达70%-80%时进行传代，避免过度生长导致细胞状态下降。

生长不均处理：若细胞生长不均，成岛状分布，可将细胞消化后重新打散，加入新鲜培养基培养]^。

污染监测与处理：

定期检查：定期观察细胞有无支原体、细菌等污染迹象。

污染处理：若发现污染，需根据污染程度决定。轻度污染可尝试用含高浓度抗生素的培养液反复清洗，但严重污染时建议弃置细胞。