产品名称 | 兔阴道平滑肌细胞 | 组织来源 | 阴道组织 |
英文名称 | Rabbit Vaginal Smooth Muscle Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3832 |
方法简介 实验室分离的兔阴道平滑肌细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔阴道平滑肌细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔阴道平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 平滑肌样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔阴道平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液于37℃消化45-90分钟
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、400g离心10分钟收集细胞沉淀
采用预混合抗体标记+磁珠分选策略，特异性富集目标细胞，纯度>87%
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
平滑肌细胞呈梭形贴壁生长，典型峰房样排列，3-5天可见明显增殖
常见问题优化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠多药耐药相关蛋白3(MRP3)elisa试剂盒 | 143B/LUC (STR)人骨肉瘤细胞 |
大鼠多药耐药关联蛋白(MRP)elisa试剂盒 | COLO320人结直肠腺细胞 |
大鼠线粒体呼吸链复合物II(MRCC II)elisa试剂盒 | A549+RFP 人肺细胞+RFP |
大鼠盐皮质激素受体(MR)elisa试剂盒 | Duck embryo鸭胚胎成纤维细胞 |
大鼠核受体共激活因子1(NCOA1)elisa试剂盒 | PK-15猪肾细胞 |
大鼠核糖核苷二磷酸还原酶(RNR)elisa试剂盒 | HEK-293（293）人胚肾细胞 |
小鼠直接高密度脂蛋白胆固醇（DHDL-C）elisa试剂盒 | AsPC-1/GEM人转移胰腺腺细胞吉西他滨耐药株 |
RAW 264.7+GFP小鼠单核巨噬白血病+GFP细胞专用培养基 | F13A1基因过表达细胞株 |
HEPA1-6小鼠肝癌细胞专用培养基 | CWC25基因过表达细胞株 |
兔原代膀胱上皮细胞专用培养基 | DTX4基因过表达细胞株 |
BHK-21细胞专用培养基 | CEP85L基因过表达细胞株 |
人原代骨关节炎软骨细胞专用培养基 | BPIFC基因过表达细胞株 |
兔阴道平滑肌细胞WaymouthMB752/1培养基 | DMRTB1基因过表达细胞株 |
BT483细胞专用培养基 | CCM2L基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅰ+透明质酸酶）+胰蛋白酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取阴道。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的阴道组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅰ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化38min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA调整细胞浓度至130000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接。
