产品名称 | 兔小气道上皮细胞 | 组织来源 | 肺组织 |
英文名称 | Rabbit Small Airway Epithelial Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3817 |
方法简介 实验室分离的兔小气道上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔小气道上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔小气道上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔小气道上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：3-4月龄日本大耳兔，体重2.5-3.0kg，单只取材获1.2-2.8×10⁶个细胞，活率>90%
试剂：胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液于37℃水浴消化30-60分钟，期间间歇振荡
消化产物经100目滤网过滤，PBS洗涤1次，400g离心10分钟收集细胞沉淀
利用免疫磁珠分选技术（MACS）纯化目标细胞，纯度可达88%以上
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
上皮细胞贴壁生长，呈多角形铺路石样排列，接种后48-72小时可见细胞集落形成
常见问题优化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
大鼠雷帕霉素靶蛋白(mTOR)elisa试剂盒 | Tcam-2人睾丸精原细胞瘤细胞 |
大鼠亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)elisa试剂盒 | STC-1小鼠小肠细胞 |
大鼠金属硫蛋白2(MT-2)elisa试剂盒 | LLC小鼠肺细胞 |
大鼠褪黑素(MT)elisa试剂盒 | Beta-TC-6小鼠胰岛胰岛Beta细胞 |
大鼠还原型辅酶Q10(CoQ10H2)elisa试剂盒 | 兔NK细胞 |
大鼠含COMM域蛋白5(COMMD5)elisa试剂盒 | PK-13猪肾细胞系 |
小鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）elisa试剂盒 | MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞 |
panc02小鼠胰腺癌细胞专用培养基 | ATP6V1C2基因过表达细胞株 |
GL-261小鼠胶质瘤细胞专用培养基 | ARHGAP8基因过表达细胞株 |
大鼠原代眼外肌成纤维细胞专用培养基 | CRPPA基因过表达细胞株 |
BDCM细胞专用培养基 | BPIFC基因过表达细胞株 |
人原代颌下腺上皮细胞专用培养基 | BBS7基因过表达细胞株 |
兔小气道上皮细胞UMR-106+luc细胞专用培养基 | ZNF616基因过表达细胞株 |
BEWO细胞专用培养基 | KIRREL3基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶）+弹性蛋白酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取肺。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的肺组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶+弹性蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化35min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA调整细胞浓度至100000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接。
