兔心肌细胞

兔心肌细胞

以新西兰大白兔心肌组织为材料，采用免疫磁珠分选(MACS)分离细胞，经胰蛋白酶-EDTA消化后传代，使用Ham's F12培养基维持细胞生长；运用数字PCR(dPCR)检测CD133的细胞表面/胞内表达，通过ATAC-seq分析蛋白表达谱，并结合多色流式细胞术探究相关信号通路。

产品名称：兔心肌细胞

英文名称： Rabbit Cardiomyocytes

组织来源： 心脏组织

默认种属 ：兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔心肌细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔心肌细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔心肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 心肌样

传代比例： -

传代特性： 不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔心肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。

2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶+弹性蛋白酶）+透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。

3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。

二、取材与预处理

1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取心脏。

2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。

3. 将纯化后的心脏组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块与Ⅳ型胶原酶+弹性蛋白酶+透明质酸酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化44min。

2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。

3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。

2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至140000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。

3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及长梭形，贴壁生长，可观察到肌管形成。

动物取材须在无菌条件下进行，相应组织获取后迅速转入含抗生素的Hanks液中转运，组织离体时间超过1小时将严重影响肌的分离效率和活力。

实验用培养皿应提前用0.01%聚鸟氨酸室温孵育2小时，PBS洗涤后风干，该预处理对肌的初始贴附具有决定性作用。

该细胞贴壁生长，增殖较为缓慢，每3-4天换液一次，传代比例建议1:2至1:4，长期培养需注意细胞衰老标记物的检测。

培养基中应加入DMEM/F12含10% FBS、1% P/S和2mM左旋肉碱，使用前需预热至38-39°C并预平衡CO2浓度至5%，血清批次更换前需进行预实验验证促生长效果。

换液时仅更换1/2至2/3体积的新鲜培养基，避免完全换液造成已贴壁细胞脱落，操作时吸管尖端距培养面至少1cm高处缓慢加入。