产品名称 | 小鼠卵泡基膜细胞 | 组织来源 | 卵巢组织 |
英文名称 | Mouse Follicular Basement Membrane Cells | 种属 | 小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3586 |
方法简介 实验室分离的小鼠卵泡基膜细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠卵泡基膜细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠卵泡基膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠卵泡基膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：5-7周龄ICR小鼠，体重18-24g，每只取材获0.35-0.75×10⁶个细胞，活力>86%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
取目标组织用无钙镁PBS洗涤3次，剔除脂肪和结缔组织后剪成小碎片，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA消化30-60分钟
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、400g离心10分钟收集细胞沉淀
利用免疫磁珠分选技术（MACS）纯化目标细胞，纯度可达88%以上
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
细胞在体外培养条件下生长稳定，形态保持一致性，连续培养3-5代后仍保持原有表型特征
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
大鼠催产素(OT)elisa试剂盒 | OCI-LY19人B细胞 |
大鼠α1酸性糖蛋白1(ORM1)elisa试剂盒 | 大鼠卵巢表面上皮细胞 |
大鼠跨膜蛋白Orai2(Orai2)elisa试剂盒 | 小鼠腹腔巨噬细胞 |
大鼠骨保护素配体(OPGL)elisa试剂盒 | 大鼠食管上皮细胞 |
大鼠分泌型免疫球蛋白G(sIgG)elisa试剂盒 | 大鼠腹腔主动脉平滑肌细胞 |
大鼠粪臭素(skatole)elisa试剂盒 | 大鼠单核细胞 |
猪S100钙结合蛋白A7（S100A7）elisa试剂盒 | 大鼠上皮细胞 |
SK-N-BE(2)人神经母瘤细胞专用培养基 | ALDH16A1基因过表达细胞株 |
RAMOS RA1人B淋巴瘤细胞专用培养基 | CFAP210基因过表达细胞株 |
人原代骨关节炎软骨细胞专用培养基 | GRAMD1C基因过表达细胞株 |
人原代胶质瘤细胞专用培养基 | AUNIP基因过表达细胞株 |
人原代输卵管平滑肌细胞专用培养基 | ZKSCAN7基因过表达细胞株 |
小鼠卵泡基膜细胞SK-BR-3细胞专用培养基 | TGM4基因过表达细胞株 |
小鼠原代食管成纤维细胞专用培养基 | GALNT18基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA（37℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. CO2吸入法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出卵巢组织。
2. 浸入冰预冷PBS液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化39min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-240000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2天换液一次，镜检观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长状态。
