Dicer-1ELISA试剂盒

Dicer-1ELISA试剂盒

1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟收集上清。

2、血浆：用EDTA或柠檬酸钠抗凝，混匀10-20分钟后2000-3000转/分离心20分钟取上清。

3、组织标本：称重后加pH7.4的PBS匀浆，液氮速冻后融化，2000-3000转/分离心20分钟取上清。

4、样本采集后24小时内完成检测，暂不检测可分装-20℃冻存，避免反复冻融。

操作步骤：

1、所有试剂提前从冰箱取出，平衡至室温后再使用，浓洗涤液盐析出时可37℃水浴助溶稀释。

2、设置标准品孔、待测样本孔，每孔分别加入梯度标准品或处理好的待测样本100μL，37℃孵育90分钟。

3、弃去孔内液体，不用洗涤，直接加入新鲜稀释的生物素化抗体工作液100μL，37℃孵育60分钟。

4、弃去液体后洗板3次，每次浸泡1-2分钟，拍干后加入酶结合物工作液100μL，37℃避光孵育30分钟。

5、弃去液体后洗板5次，每孔加入底物溶液90μL，37℃避光孵育10-20分钟，可见孔内出现蓝色梯度。

6、每孔快速加入终止液50μL，颜色由蓝立即转为黄色，15分钟内用酶标仪在450nm波长读取OD值。

试剂盒预先包被Dicer-1捕获抗体的微孔中依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体经过温育并彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色在酸的作用下最终转化为黄色颜色深浅与样本中Dicer-1的含量呈正相关。

样本要求：应避免使用溶血或高血脂的标本，标本中的悬浮物应通过离心去除。待测样本应尽早检测，如需保存，应在-20℃或-80℃冷冻，并避免反复冻融。

试剂准备：使用前需将所有试剂置于室温平衡约30分钟。浓缩洗涤液若有晶体析出，需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。

操作规范：

为避免交叉污染，添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。

显色剂（TMB）应避免光照，从无色变为蓝色为正常现象。

洗板步骤对结果准确性至关重要，无论是手动还是自动洗板，都应确保洗涤充分。

安全提示：试剂盒中的终止液（稀硫酸）具有腐蚀性，显色剂和某些成分可能引起皮肤或呼吸道刺激，操作时应佩戴防护手套、眼镜等，并在处理后彻底洗手。