玻连蛋白/体外粘连蛋白(VN/CD51+CD61)ELISA试剂盒

玻连蛋白/体外粘连蛋白(VN/CD51+CD61)ELISA试剂盒

试剂盒预先包被玻连蛋白/体外粘连蛋白(VN/CD51+CD61)捕获抗体的微孔中依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体经过温育并彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色在酸的作用下最终转化为黄色颜色深浅与样本中vitronectin,VNR的含量呈正相关。

第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)

试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。

注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。

标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。

样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。

第二阶段：加样与孵育 

加样：

在酶标板的对应孔中，分别加入 100 μL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。

设置空白孔（只加稀释液）。

建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。

孵育：

盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。

原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。

 第三阶段：洗板与检测抗体

洗板（关键步骤）：

弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 μL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。

重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。

加检测抗体：

每孔加入 100 μL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。

盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。

关键点 说明

洗板 洗板不彻底是背景值高（花板）的主要原因。务必浸泡并拍干。

防污染 加样时枪头不要混用，避免交叉污染导致假阳性。

气泡 加样和洗板时避免产生气泡，气泡会干扰酶标仪读数。

时间控制  加样和加终止液的动作要快，尽量控制整板操作时间差在5-10分钟内。