人玻连蛋白/体外粘连蛋白(VN/CD51+CD61)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA原理检测样本中人玻连蛋白(VN)含量。试剂盒固相载体预固定VN特异性捕获抗体，孵育后样本中的VN抗原与固相抗体特异性识别结合，洗涤纯化后加入酶标检测抗体形成免疫夹心复合物，酶催化底物发生显色反应，吸光度数值与样本中VN浓度呈正相关，通过标准曲线拟合可精准定量目标蛋白水平。
产品参数：

‌灵敏度：0.1ng/mL

检测范围：0.2ng/mL～12.9ng/mL

反应时间：包被捕获 73min，酶标二抗 29min，显色 17min

显色系统：A/B 双液配比 TMB 显色体系

检测波长：450nm

特异性：完整识别 VN 蛋白及 CD51/CD61 复合物，纤连蛋白无交叉反应

重复性：板内 CV＜6.7%，板间 CV＜9.7%

注意事项：血浆样本需添加抗凝剂，不可使用肝素过量标本避免蛋白结合干扰
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

微孔板加入梯度标准品、血浆待测样本、生物素化一抗，封板 37℃孵育 65min，洗板 5 次。

洗涤液洗板浸泡 20s 弃废液，多次洗涤后吸干微孔。

加入 HRP 标记亲和素避光孵育 27min，再次洗板 6 次。

加入显色底物避光反应 13min，终止液终止显色。

酶标仪 450nm 读取每孔 OD 数值。

拟合标准曲线得到定量公式。

计算样本 VN 蛋白含量，校正稀释倍数后确定最终结果。