产品名称 | 人外周血巨噬细胞 | 组织来源 | 外周血组织 |
英文名称 | Human Peripheral Blood Macrophages | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3474 |
方法简介 实验室分离的人外周血巨噬细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人外周血巨噬细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人外周血巨噬细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 不规则形
传代比例： -
传代特性： 不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人外周血巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体（18-55岁），手术废弃组织经伦理委员会批准获取，每例可分离1.0-3.0×10⁶个细胞，活力>85%
试剂：0.1%胰蛋白酶、Ⅰ型/Ⅳ型胶原酶混合液、DNase I、BSA、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
抗凝血液经Ficoll-Hypaque梯度离心分离外周血单个核细胞（PBMCs），PBS洗涤后重悬
细胞悬液经200目滤网过滤去除组织碎片，400g离心10分钟收集细胞沉淀，PBS洗涤1次
利用CD45磁珠阳性选择策略特异性富集白细胞，纯度>90%
原代培养要点
调整细胞密度至5×10⁵ cells/mL接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱中悬浮培养
悬浮培养条件下细胞活性保持稳定，每2天半量换液维持细胞密度
常见问题优化
细胞贴壁率低：免疫细胞本为悬浮生长，注意使用低吸附培养器皿
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要细胞因子，确保CO₂浓度和温度稳定
图
大鼠前列腺素F(PGF)elisa试剂盒 | MLMA淋巴癌 |
大鼠前列腺素E2(PGE2)elisa试剂盒 | 小鼠腹膜间皮细胞 |
大鼠前列腺素E(PGE)elisa试剂盒 | 羊子宫内膜上皮细胞 |
大鼠前列腺素D1(PGD1)elisa试剂盒 | 大鼠成骨细胞 |
大鼠弹力蛋白酶(Elastase)elisa试剂盒 | 人乳腺导管癌细胞 ZR-75-1(STR鉴定正确) |
大鼠弹性蛋白酶(Elastase)elisa试剂盒 | 小鼠外周血单核细胞 |
猪沉默调节蛋白1（SIRT1）elisa试剂盒 | 人食管组织源成纤维细胞 |
U118MG（U-118MG）人脑星形胶质母瘤细胞专用培养基 | FBXO25基因过表达细胞株 |
CHL中国仓鼠肺细胞专用培养基 | ARB2A基因过表达细胞株 |
兔原代胎盘绒毛膜滋养层细胞专用培养基 | GPR19基因过表达细胞株 |
HEC-1-A细胞专用培养基 | GDF3基因过表达细胞株 |
大鼠原代胸主动脉平滑肌细胞专用培养基 | ADH1A基因过表达细胞株 |
人外周血巨噬细胞大鼠原代少突胶质细胞专用培养基 | COG6基因过表达细胞株 |
HELA+luc细胞专用培养基 | GLRA2基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷PBS缓冲液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 人源组织样本（临床手术废弃组织）处理。
二、取材与预处理
1. 经伦理委员会批准获取，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取目标组织，冰预冷PBS缓冲液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化30min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经200μm滤膜过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至未涂层预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天更换新鲜培养基，定期倒置显微镜观察悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强及生长情况。
