产品名称 | 人肺癌成纤维细胞 | 组织来源 | 肺组织 |
英文名称 | Human Lung Cancer Fibroblasts | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3456 |
方法简介 实验室分离的人肺癌成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人肺癌成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人肺癌成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人肺癌成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康志愿者供体组织（经医院伦理委员会批准），每例取材获0.8-2.5×10⁶个细胞，活力>90%
试剂：弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS于37℃消化30-45分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按1-2×10⁵密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
贴壁细胞生长呈接触抑制，融合度达80%时需及时传代，避免过度融合导致细胞老化
常见问题优化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
大鼠磷酸化糖原合成酶激酶3β(PGSK3β)elisa试剂盒 | Farage淋巴癌 |
大鼠磷酸化G蛋白偶合受体激酶2(p-GRK2)elisa试剂盒 | 人DC细胞 |
大鼠P糖蛋白;渗透性糖蛋白(P-gp)elisa试剂盒 | 猪视网膜色素上皮细胞 |
大鼠磷酸激酶(PGK)elisa试剂盒 | 人腹膜毛细血管内皮细胞 |
大鼠胆碱;乙醇胺磷酸转移酶1(CEPT1)elisa试剂盒 | 人高转移肺癌细胞95-D(STR鉴定正确) |
大鼠胆碱乙酰化酶(CHAc)elisa试剂盒 | 兔胸腺上皮细胞 |
猪程序性死亡-1抗体（PD-1Ab）elisa试剂盒 | 人原代肾上腺皮质细胞 |
TPC-1人乳头状甲状腺癌株细胞专用培养基 | RFX2基因过表达细胞株 |
RLE-6TN大鼠肺泡II型细胞专用培养基 | ZNF510基因过表达细胞株 |
兔原代视网膜微血管内皮细胞专用培养基 | DNAI7基因过表达细胞株 |
HCE-T细胞专用培养基 | CTU1基因过表达细胞株 |
大鼠原代牙周膜成纤维细胞专用培养基 | NTRK2基因过表达细胞株 |
人肺癌成纤维细胞大鼠原代前脂肪细胞专用培养基 | GLRA2基因过表达细胞株 |
HCT-8细胞专用培养基 | CLEC14A基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS缓冲液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 经伦理委员会批准获取，碘伏消毒术野，无菌操作取出成纤维细胞组织。
2. 浸入冰预冷PBS缓冲液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化35min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用差速贴壁法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-200000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察长梭形或纺锤形，贴壁生长，细胞核大而圆，核仁明显及生长状态。
