产品名称 | 人肺小动脉内皮细胞 | 组织来源 | 肺组织 |
英文名称 | Human Pulmonary Arteriolar Endothelial Cells | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3446 |
方法简介 实验室分离的人肺小动脉内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人肺小动脉内皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人肺小动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人肺小动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体（18-55岁），手术废弃组织经伦理委员会批准获取，每例可分离1.0-3.0×10⁶个细胞，活力>85%
试剂：胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
取目标组织用无钙镁PBS洗涤3次，剔除脂肪和结缔组织后剪成小碎片，加入胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液消化30-45分钟
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、400g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（400g，10分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按1-2×10⁵密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
内皮细胞生长需要较高的血清浓度和血管内皮生长因子支持，注意维持培养基新鲜度
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠I型前胶原氨基端肽(PINT)elisa试剂盒 | Hi-five(BTI-Tn-5B1-4)昆虫细胞 |
大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(P-IKBα)elisa试剂盒 | 狗肠神经胶质细胞 |
大鼠多聚免疫球蛋白受体(PIGR)elisa试剂盒 | 猪子宫内膜上皮细胞 |
大鼠钾离子通道3(PIC3)elisa试剂盒 | 人脐静脉平滑肌细胞 |
大鼠单核细胞趋化蛋白(MCP)elisa试剂盒 | 人胚肺成纤维细胞IMR-90 (STR鉴定正确) |
大鼠单核细胞趋化蛋白11(MCP-11)elisa试剂盒 | 兔肺动脉内皮细胞 |
猪促生长激素释放激素（GHRH）elisa试剂盒 | 兔原代心肌干细胞 |
SJSA-1人骨肉瘤细胞专用培养基 | CFAP20DC基因过表达细胞株 |
PC12高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤 高分化 细胞专用培养基 | COL10A1基因过表达细胞株 |
大鼠原代肠微血管内皮细胞专用培养基 | ZSCAN10基因过表达细胞株 |
HCC1954细胞专用培养基 | NTRK2基因过表达细胞株 |
大鼠原代阴道真皮成纤维细胞专用培养基 | C8orf58基因过表达细胞株 |
人肺小动脉内皮细胞大鼠原代脾源性内皮祖细胞专用培养基 | PTPDC1基因过表达细胞株 |
HCC-LM3+LUC细胞专用培养基 | TGM7基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS缓冲液、消化液（Ⅳ型胶原酶、透明质酸酶）、弹性蛋白酶、DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 经伦理委员会批准获取，碘伏消毒术野，无菌操作取出肺组织。
2. 浸入冰预冷PBS缓冲液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶混合消化液，37℃消化38min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用Percoll密度梯度离心纯化内皮细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-230000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察鹅卵石样铺路石状排列，贴壁生长，细胞边界清晰及生长状态。
