人胰腺癌组织源星状细胞

人胰腺癌组织源星状细胞

从伦理批准的人源组织的相关组织中分离纯化细胞，采用酶消化结合梯度离心获得高纯度细胞群体，在MEM基础培养基下扩增培养；运用bulk RNA-seq检测SSEA-1, vimentin标志物表达，通过EdU掺入实验分析蛋白表达谱，并结合ChIP-seq综合评价细胞表型特征。

产品名称：人胰腺癌组织源星状细胞

英文名称： Human Pancreatic Cancer Tissue-derived Stellate Cells

组织来源： 胰腺组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人胰腺癌组织源星状细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人胰腺癌组织源星状细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人胰腺癌组织源星状细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:3

传代特性： 可传5-8代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人胰腺癌组织源星状细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。

2. 配制灌洗液 冰预冷PBS缓冲液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、DMEM + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。

3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），冰浴预冷所有缓冲液。

二、取材与预处理

1. 经伦理委员会批准获取，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取肿瘤细胞。

2. 置于冰预冷PBS缓冲液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。

3. 将纯化后的肿瘤细胞组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化41min。

2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。

3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。

2. 用DMEM + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至110000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。

3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及形态多样，贴壁或悬浮生长，核大深染，核质比高。

取材时必须在冰上低温操作，30分钟内完成胰腺组织的分离与纯化处理，室温暴露时间过长会直接导致细胞活性下降40%以上。

培养皿需用胶原蛋白-I型(5μg/cm2)包被过夜，次日PBS洗涤3次后使用，未包被表面腺癌组织源星状难以正常贴附和铺展。

该细胞贴壁生长，增殖较为缓慢，每3-4天换液一次，传代比例建议1:2至1:4，长期培养需注意细胞衰老标记物的检测。

培养过程中需持续添加DMEM/F12含10% FBS和1%青霉素-链霉素以维持细胞最佳生长状态，抗生素浓度不宜过高以免影响细胞代谢活性，建议常规使用1% P/S即可。

每次换液前应观察细胞形态和密度，弃去旧培养基时动作轻柔沿壁缓慢吸除，避免扰动贴壁细胞层，新培养基预热至37°C后使用。