产品名称 | 小鼠羊膜上皮细胞 | 组织来源 | 胎盘组织 |
英文名称 | Mouse Amniotic Epithelial Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3338 |
方法简介 实验室分离的小鼠羊膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠羊膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠羊膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠羊膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠突触后致密物95(PSD-95)elisa试剂盒 | U-937 人淋巴瘤细胞 |
大鼠过氧化物还原酶6(Prx6)elisa试剂盒 | 小鼠肾上皮细胞 |
大鼠磷酸核糖焦磷酸酰基转移酶(PRPPAT)elisa试剂盒 | 小鼠腹膜间皮细胞 |
大鼠蛋白S(Protein S)elisa试剂盒 | MPC-83 (小鼠胰腺腺泡细胞) |
大鼠补体成分5a受体1(C5aR1)elisa试剂盒 | 人胚肾上皮包装细胞GP2-293(STR鉴定正确) |
大鼠补体蛋白3(C3)elisa试剂盒 | 兔骨骼肌成纤维细胞 |
猪弓形虫（Tox）elisa试剂盒 | 大鼠原代视网膜色素上皮细胞 |
Panc 05.04人胰腺癌上皮细胞专用培养基 | CYP4X1基因过表达细胞株 |
SVEC4-10小鼠淋巴结血管上皮样 细胞专用培养基 | BMPR1B基因过表达细胞株 |
人原代羊膜间充质干细胞专用培养基 | ACOT6基因过表达细胞株 |
DU4475细胞专用培养基 | ZSWIM4基因过表达细胞株 |
人胆囊上皮细胞永生化+GFP细胞专用培养基 | CCNI2基因过表达细胞株 |
小鼠羊膜上皮细胞大鼠原代颌骨骨髓间充质干细胞专用培养基 | DDX4基因过表达细胞株 |
ECV-304+RFP细胞专用培养基 | MDM1基因过表达细胞株 |
羊膜组织分离取材：孕鼠安乐死后无菌取出胚胎囊，剥离完整羊膜组织，预冷 PBS 充分冲洗，仔细分离羊膜，去除绒毛膜、胚胎组织，识别羊膜上皮侧。
EDTA 预解离上皮层：羊膜组织放入含 EDTA 解离缓冲液，4℃低温孵育 30‑40 min，松动羊膜上皮层与下层间质之间连接结构。
胰酶消化释放上皮细胞：弃解离液，加入低浓度胰酶，37℃水浴短时间消化 15‑20 min，间断摇晃，解离羊膜上皮细胞，不要过度消化损伤细胞活性。
终止消化收集过滤悬液：羊膜上皮完全培养基终止酶消化，反复吹打羊膜组织，洗脱上皮细胞，70 μm 筛网过滤除去羊膜间质组织残渣，收集细胞悬液。
离心洗涤去除酶残留：1000 r/min 离心 7 min，弃上清废液，羊膜上皮专用完全培养基轻柔重悬沉淀，再次离心洗涤，清除消化酶、血细胞碎片。
基质胶包被板接种：调节细胞悬液浓度，接种基质胶提前包被的培养板，置于 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育，基质胶显著提升羊膜上皮贴壁存活率。
换液纯化培养：24h 半量换液，去除悬浮死细胞碎片；每 2‑3 天更换上皮完全培养基；抑制羊膜间质杂细胞增殖；原代羊膜上皮增殖能力有限，避免长期体外培养。
