小鼠食管上皮细胞

小鼠食管上皮细胞

基于组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的食管上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：小鼠食管上皮细胞

英文名称： Mouse Esophageal Epithelial Cells

组织来源： 食管组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠食管上皮细胞采用机械分离法结合组织贴块法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠食管上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠食管上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠食管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出小鼠食管上皮细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，冻存液完全融化，75% 酒精擦拭冻存管外壁，送入超净工作台。

稀释冻存细胞悬液：将冻存管细胞悬液转移至装有预热食管上皮细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，降低冻存试剂毒性。

离心富集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心完毕，小心吸除全部上清液，不要扰动管底细胞沉淀。

重悬打散细胞团：加入食管上皮细胞专用完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，打散团聚细胞，制备单细胞悬液，避免机械损伤上皮细胞。

计数铺板接种：取样计数活细胞，按照实验设定密度接种培养板，十字晃动培养器皿，保证细胞铺板均匀。

培养箱静置孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24h，尽量少开启培养箱门，维持稳定培养环境，促进细胞贴壁。

换液和状态监测：24h 镜检，观察上皮鹅卵石样形态，弃除旧培养基更换新鲜培养基；细胞汇合 80% 左右，可开展损伤修复、药物干预实验。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。