小鼠肾足突细胞

小鼠肾足突细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的肾足突细胞来源组织中分离原代细胞，经胶原酶 II 和胰蛋白酶联合消化后，通过密度梯度离心纯化目标细胞，接种于明胶包被的培养皿中使用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、1% 双抗）培养；通过免疫荧光染色检测细胞特异性标志物表达，结合形态学观察和 RT-qPCR 分子鉴定确认细胞身份。

产品名称：小鼠肾足突细胞

英文名称： Mouse Renal Podocytes

组织来源： 肾组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肾足突细胞采用机械研磨过不同孔径不锈钢网筛结合胶原酶消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肾足突细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠肾足突细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肾足突细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出小鼠肾足突细胞冻存管，37℃水浴快速晃动融化冻存液，冻存液融化完毕，酒精消毒管壁，带入超净工作台。

稀释冻存细胞悬液：将冻存管全部细胞悬液转移至预温足突细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，稀释 DMSO 降低毒性。

离心富集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心结束，缓慢吸除上清液，切勿吹散管底脆弱的细胞沉淀。

轻柔重悬细胞：加入肾足突细胞专用完全培养基，极轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，足突细胞十分脆弱，严禁大力吹打造成细胞破碎。

活细胞计数铺板：取样计数活细胞，接种至提前包被的培养板，控制合适接种密度，十字缓慢晃动培养板，均匀铺散细胞。

培养箱孵育贴壁：平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24‑48h，不要频繁挪动培养器皿，保障细胞伸展形成足突结构。

换液与形态鉴定：孵育结束镜检，观察细胞足突形态，吸弃旧培养基更换新鲜培养基；待细胞形态完整稳定，用于肾脏损伤相关体外造模实验。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。