1.产品名称：小鼠肾足突细胞
2.组织来源：肾组织
3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介：
小鼠肾足突细胞分离自肾组织；肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛，被鲍氏囊所包裹，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球。肾小球内的微血管不像其他微血管，汇流入静脉，而是流入出球小动脉。在肾小球内，微血管受到高压，而加速了超滤作用(hyperfiltration)的进行。微血管中的血液经由超滤作用之后，形成滤液，渗入鲍氏囊内。肾小球与鲍氏囊合称为肾小体，肾小球的过滤速率便称为肾小球过滤率。足细胞（podocyte）即肾小囊脏层上皮细胞，它附着于肾小球基底膜（GBM）的外侧，连同GBM和毛细血管内皮一起构成了肾小球血液滤过屏障。足细胞特殊的解剖位置，使得其体内研究较为困难；又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞，体外培养的原代细胞不能增殖。足细胞呈星型多突状，胞体较大，由胞体伸出许多突起，又称足突（FP），呈指状交叉复盖于GBM外表面，并通过黏附分子和蛋白多糖分子与GBM相连。足细胞在正常情况下可以分泌GBM的主要组成成分，IV型胶原和纤维连接蛋白（FN）；在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具有降解GBM作用的基质金属蛋白酶（MMPs）和组织蛋白酶，从而在GBM的代谢平衡中发挥重要作用。足细胞之间邻近的足突相互交替，形成了许多30-40nm的裂孔，孔上覆盖一层厚4-6nm的裂孔隔膜，即肾小球足突间裂孔隔膜。后者是血浆蛋白通过脉管系统的最后屏障，对于维持肾小球滤过屏障结构与功能完整性发挥关键作用。
本公司生产的小鼠肾足突细胞采用机械研磨过不同孔径不锈钢网筛结合胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Nephrin、WT-1、Synaptopodin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5.培养基信息：
M199、FBS、上皮细胞生长添加剂、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等
细胞培养步骤
a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养。
贴壁细胞传代步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
悬浮细胞传代步骤日下：
1、半换液法
半换液处理，竖着培养瓶在培养箱静置1小时左右，轻轻吸掉3ml左右培养基，然后补给3ml的完全培养基，如果培养基变色慢，可直接加500ul左右FBS，传代的时候可以直接补给5ml培养基 分两个培养瓶培养，一般这样传代3次左右可以离心传代一次，去掉死细胞。
2、离心换液法
如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
b、细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；
3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。
C、细胞复苏：
1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2、将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
小鼠肾足突细胞注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
