小鼠三叉神经元细胞

小鼠三叉神经元细胞

运用胶原酶 IV 和 Dispase 联合消化法从C57BL/6小鼠三叉神经元细胞神经组织中分离神经元前体细胞，经密度梯度离心纯化后接种于 PLL 包被的培养皿中，采用含 B-27 supplement、NGF（10 ng/mL）和 bFGF（5 ng/mL）的 Neurobasal 完全培养基培养；通过免疫荧光双标检测 β-III-tubulin/Map2 共表达，免疫细胞化学染色显示突触蛋白（Synaptophysin）阳性，并经钙成像实验检测神经元电生理活性。

产品名称：小鼠三叉神经元细胞

英文名称： Mouse Trigeminal Neurons

组织来源： 三叉神经组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠三叉神经元细胞采用胰蛋白酶消化法结合神经元专用培养基培养、化学试剂抑制法筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠三叉神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 小鼠三叉神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 神经元细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 0.125%胰蛋白酶

小鼠三叉神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌实验体系准备：超净台紫外灭菌 30min，准备小鼠神经元专用无血清培养基、无菌 PBS、神经元温和消化液、多聚赖氨酸包被培养板 / 瓶、无菌离心管；37℃水浴回温试剂，神经元为终末分化细胞，几乎不增殖，器皿必须提前包被多聚赖氨酸，全程操作动作轻柔。

冻存神经元细胞复苏融化：液氮取出冻存管，37℃水浴快速晃动，严格控制 1‑2min 融化冻存液；冻存管外壁酒精消毒移入超净台，细胞悬液缓慢转移至预温神经元无血清培养基离心管，极轻柔颠倒混匀，减少神经元机械损伤。

低速离心降低神经元损伤：离心管配平，800r/min 低速离心 7min；神经元较为脆弱，不可高速离心；离心结束，超净台缓慢吸弃上层上清，小心留存底部细胞沉淀。

轻柔重悬计数接种包被器皿：加入预热神经元专用无血清培养基，使用大口径枪头轻柔吹打沉淀，避免剪切力损伤神经元；细胞计数，调整接种密度，接种至多聚赖氨酸包被完成的培养板，神经元不可高密度过度接种。

培养箱静置孵育，严禁频繁挪动：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 72h，全程尽量不开关箱门、不移动培养板，等待神经元贴壁，长出神经突起网络。

半量换液维持神经元存活：72h 之后执行半量换液，仅吸出一半旧培养基，补入同等体积新鲜预热神经元培养基，禁止全部弃除培养液，防止神经元环境剧烈变化死亡；之后每 3 天半量换液。

样本处理，神经元不做传代扩增：三叉神经元属于终末分化细胞，无法传代扩增；细胞生长至合适状态后，直接用于药物处理、免疫荧光、电生理等实验；如需后续实验，重新复苏新的细胞批次，不可消化传代。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。