小鼠脑微血管周细胞

小鼠脑微血管周细胞

基于原代组织酶消化法从C57BL/6小鼠脑微血管周细胞组织标本获取单细胞悬液，经密度梯度离心和免疫磁珠分选（MACS）双重纯化后，接种于 Matrigel 或胶原包被的培养表面，使用优化配方的专用培养基（含 10% FBS、特定细胞因子及添加剂）培养；通过多组学鉴定策略（免疫荧光/流式/转录组）确认细胞身份，并采用功能实验验证其生物学活性。

产品名称：小鼠脑微血管周细胞

英文名称： Mouse Brain Microvascular Pericytes

组织来源： 大脑组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠脑微血管周细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠脑微血管周细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 小鼠脑微血管周细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠脑微血管周细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：脑微血管周细胞完全培养基、PBS 缓冲液、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液置于 37℃水浴回温，超净台紫外照射 30min 灭菌，备好 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌枪头耗材，核对冻存管信息，确认无破损渗漏。

水浴解冻冻存管：从液氮罐取出冻存管，浸入 37℃温水，轻柔摇晃冻存管 1‑2min，大部分冰晶融化，留有少量冰屑即可取出，酒精擦拭管壁，移入超净台。

稀释离心去除冻存剂：无菌拧开冻存管，细胞悬液缓慢滴入装有 4.5mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降活细胞，弃去上层含 DMSO 的冻存上清。

重悬接种铺瓶：倒掉离心上清，加入 2mL 脑微血管周细胞完全培养基，轻柔吹打重悬管底细胞沉淀，打散细胞团块，将细胞悬液转移至 T25 培养瓶，补加足量培养基，水平多角度晃动培养瓶，使细胞均匀铺在瓶底。

静置孵育贴壁：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，减少挪动，利于周细胞贴壁伸展。

换液清除死细胞：培养 24h 后取出培养瓶，吸弃旧培养基，无菌 PBS 轻柔冲洗细胞层，去除漂浮死细胞、碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日显微镜观察细胞形态，检查污染情况。

传代扩增：细胞汇合度 80‑85%，弃培养基，PBS 清洗细胞层 2 次，加入胰酶消化液，37℃孵育 2‑4min，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集全部细胞悬液，离心，按比例分瓶传代。

1.组织取材后迅速置于含抗生素的PBS中清洗，去除血液和结缔组织外膜后剪碎备用。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.该细胞增殖迅速，原代培养2-3周可获得足够细胞，传代后可维持培养15-20代左右。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。