小鼠巩膜成纤维细胞

小鼠巩膜成纤维细胞

从C57BL/6小鼠巩膜成纤维细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：小鼠巩膜成纤维细胞

英文名称： Mouse Scleral Fibroblasts

组织来源： 巩膜组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠巩膜成纤维细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠巩膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠巩膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠巩膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存复苏：液氮取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，留有微量冰晶取出，酒精擦拭管壁进入超净台。

悬液转移：无菌开启冻存管，细胞悬液转移至巩膜成纤维细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔混匀。

离心洗涤：1000r/min 离心 5min，离心结束，弃去上层冻存上清，留存底部细胞沉淀。

重悬细胞：加入预热专用完全培养基，吹打沉淀充分打散细胞团，制备单细胞悬液。

接种铺板：细胞计数，按推荐密度接种，十字摇晃培养瓶，细胞均匀铺底。

恒温孵育：置于 37℃、5% CO₂培养箱静置 24h，不挪动培养容器。

换液观察：24h 更换新鲜培养基，每 2‑3 天换液，观察长梭形成纤维细胞形态，汇合 85‑90% 进行传代。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞接种密度对实验结果影响显著，建议根据实验目的优化接种密度参数。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。