大鼠巩膜成纤维细胞 新品

细胞简介：

大鼠巩膜成纤维细胞分离自巩膜组织，巩膜是眼球壁的主要组成之一。是眼球纤维膜的后5/6部分。前方联接角膜，后方与视神经的鞘膜延续。巩膜在视神经穿出部附近最厚，愈前愈薄，在肌腱附着处又复增厚。其与角膜交界处，外面有环形的角膜沟，深部有巩膜静脉窦。小儿的巩膜为浅蓝色，成年为白色，老年因脂肪沉着而带黄色。巩膜结构坚韧，有支持和保护眼内组织的作用。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

产品信息：

方法简介：实验室分离的大鼠巩膜成纤维细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的大鼠巩膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品名称：大鼠巩膜成纤维细胞

组织来源：巩膜组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%胰蛋白酶大鼠巩膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
原代细胞传代：

传代时机判断

细胞汇合度达到80%-90%时进行传代，避免细胞过度汇合导致接触抑制，影响增殖能力

观察细胞状态：细胞形态正常，无明显漂浮、污染迹象

消化环节控制

消化前准备：吸出旧培养基，用PBS轻轻冲洗细胞1-2次，去除血清（血清会抑制胰蛋白酶活性）

消化液选择：同原代分离，根据细胞类型选择合适的消化酶，胰蛋白酶消化时间一般为1-5分钟，胶原酶消化时间为10-30分钟

消化终止：显微镜下观察到细胞回缩变圆、间隙增大时，立即加入含血清的培养基终止消化，血清浓度不低于10%

细胞吹打：用移液器轻轻吹打细胞，避免过度用力导致细胞破裂，吹打次数一般为10-15次

传代比例控制

传代比例根据细胞生长速度调整：生长速度快的细胞（如成纤维细胞）可按1:3-1:6传代，生长速度慢的细胞（如内皮细胞、神经细胞）按1:2传代

首次传代比例可适当提高（如1:2），待细胞适应体外培养环境后再调整为常规比例

传代后培养

接种后轻轻晃动培养瓶，使细胞均匀分布，放入培养箱中培养

24小时内不要晃动培养瓶，避免细胞贴壁不牢

培养24-48小时后观察细胞贴壁情况，更换新鲜培养基，去除未贴壁的死细胞和细胞碎片
收货与处理流程：

1. 收货检查

收到细胞后首先观察T25培养瓶瓶身是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有异常及时联系。

2. 细胞复苏（仅针对冻存细胞）

将冻存管迅速放入37℃温水中摇晃融化，时间约1分钟

加入4-5ml完全培养基混匀，1000RPM常温离心4-5分钟

弃去上清液，补加1-2ml培养液吹匀，移入含5ml培养基的培养瓶中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度

3. 新鲜细胞处理

用75%酒精消毒培养瓶瓶身，拆下封口膜

放入37℃、5%CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，稳定细胞状态后再进行后续操作

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