产品名称 | 兔胸腺上皮细胞 | 组织来源 | 胸腺组织 |
英文名称 | Rabbit Thymic Epithelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3709 |
方法简介 实验室分离的兔胸腺上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔胸腺上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔胸腺上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔胸腺上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠沉默调节蛋白6(SIRT6)elisa试剂盒 | PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞 |
大鼠沉默调节蛋白2(SIRT2)elisa试剂盒 | 小鼠嗅鞘细胞 |
大鼠沉默调节蛋白1(SIRT1)elisa试剂盒 | 小鼠骨髓肥大细胞 |
大鼠表面免疫原性蛋白(SIP)elisa试剂盒 | A7r5 (大鼠胸大动脉平滑肌细胞) (种属鉴定正确) |
大鼠α干扰素(IFN-α)elisa试剂盒 | 人葡萄膜黑色素瘤92-1(STR鉴定正确) |
大鼠α黑色素细胞刺激素(α-MSH)elisa试剂盒 | 兔肠肌成纤维细胞 |
猪卵黄免疫球蛋白（IgY）elisa试剂盒 | 大鼠原代胸腺基质细胞 |
SK-N-SH人神经母瘤细胞专用培养基 | GRPR基因过表达细胞株 |
RL95-2人子宫内膜癌细胞专用培养基 | GAS2L3基因过表达细胞株 |
大鼠原代肝外胆管上皮细胞专用培养基 | HAO2基因过表达细胞株 |
小鼠原代食管成纤维细胞专用培养基 | CSPG5基因过表达细胞株 |
人原代食管平滑肌细胞专用培养基 | ATL1基因过表达细胞株 |
兔胸腺上皮细胞SK-MEL-28细胞专用培养 | EGR3基因过表达细胞株 |
原代比格犬软骨细胞专用培养基 | TRIM42基因过表达细胞株 |
步骤一：胸腺组织无菌取材修剪 无菌条件下快速摘取兔新鲜胸腺组织，放入预冷无菌PBS缓冲液中反复冲洗，清除血迹、筋膜与杂质，剔除胸腺脂肪、结缔组织与坏死组织，将纯净胸腺组织修剪为1mm³细小组织碎块，全程低温无菌操作。
步骤二：胸腺组织酶解消化 加入预热的0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，完全浸没胸腺组织碎块，37℃水浴恒温消化12分钟，每隔4分钟轻柔摇匀一次，促进组织解离，释放胸腺上皮细胞。
步骤三：终止消化与过滤除渣 消化完成后立即加入含血清完全培养基终止酶活性，轻柔吹打混合液使细胞分散，经200目细胞筛过滤，去除未消化组织残渣，收集胸腺上皮细胞悬液。
步骤四：离心洗涤纯化细胞 1200rpm离心6分钟，弃上清液，保留细胞沉淀。无菌PBS轻柔重悬洗涤2次，彻底清除消化液残留、淋巴细胞杂质与组织碎片，纯化上皮细胞。
步骤五：活细胞计数与浓度调整 胸腺上皮细胞专用培养基重悬细胞，制备单细胞悬液，台盼蓝染色计数活细胞，将细胞浓度调整至7×10⁵个/mL，适配上皮细胞贴壁增殖特性。
步骤六：规范接种均匀铺板 将细胞悬液接种至无菌培养皿中，轻轻十字晃动铺匀，保证细胞均匀贴壁生长，清晰标注细胞批次、接种时间与培养条件。
步骤七：恒温培养与定期养护 置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养24小时，贴壁完成后更换新鲜培养基，去除漂浮死细胞与杂质。后续每48小时换液一次，每日观察上皮细胞形态、增殖融合状态，及时排查污染异常。
