兔胃黏膜上皮细胞

兔胃黏膜上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从新西兰大白兔靶组织中分离胃黏膜上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：兔胃黏膜上皮细胞

英文名称： Rabbit Gastric Mucosal Epithelial Cells

组织来源： 胃组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔胃黏膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔胃黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔胃黏膜上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔胃黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：组织取材与无菌预处理 无菌条件下摘取兔胃黏膜新鲜组织，置于预冷无菌PBS缓冲液中，快速冲洗组织表面血迹、黏液与杂质，剔除黏膜下层结缔组织、脂肪组织，仅保留纯净胃黏膜上皮组织。将修剪后的组织剪成1mm³左右细小组织碎块，全程低温无菌操作，防止组织细胞坏死、污染。

步骤二：组织消化解离细胞 向组织碎块中加入预热的0.25%胰蛋白酶-胶原酶复合消化液，完全浸没组织块，置于37℃水浴恒温消化15分钟，每隔5分钟轻柔摇晃一次，促进消化液充分渗透。消化至组织松散、肉眼无明显块状组织时，加入含血清完全培养基终止消化，中和酶活性。

步骤三：过滤离心纯化细胞悬液 消化后的混合液经200目无菌细胞筛过滤，去除未消化完全的组织残渣，收集过滤后的细胞悬液。将悬液1200rpm离心6分钟，弃上清，保留管底细胞沉淀，加入无菌PBS轻柔重悬洗涤，重复离心洗涤2次，彻底清除消化液残留与组织杂质。

步骤四：细胞分散与活性筛选 洗涤完成后加入胃黏膜上皮细胞专用完全培养基，轻柔反复吹打细胞沉淀，制备均匀单细胞悬液，尽量减少细胞团聚结块。通过静置沉淀去除少量未分散组织，筛选活性良好的单细胞，保障后续培养纯度。

步骤五：精准计数与浓度调整 取样进行血球计数板计数，台盼蓝染色区分活死细胞，统计有效活细胞数量，根据上皮细胞生长特性，将细胞悬液浓度调整至7×10⁵个/mL，该浓度可保障细胞快速贴壁、增殖分化，避免密度异常导致的生长不良。

步骤六：接种铺板均匀培养 将调好浓度的细胞悬液接种至提前润洗的无菌培养皿中，轻轻十字晃动培养皿，使细胞均匀分布于皿底，无局部堆积空白。标注细胞名称、取材时间、接种参数，规范实验标识。

步骤七：恒温静置养护与换液 置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱静置培养24小时，严禁移动培养皿，保障上皮细胞牢固贴壁。24小时后首次换液，去除漂浮死细胞与杂质，后续每48小时更换新鲜培养基，每日观察细胞形态、贴壁增殖状态，及时排查污染问题。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.使用纤维连接蛋白(10ug/ml)包被培养器皿可显著改善内皮细胞贴壁速度和铺展形态。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。