产品名称 | 兔肾小管上皮细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Rabbit Renal Tubular Epithelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3619 |
方法简介 实验室分离的兔肾小管上皮细胞采用先机械研磨过不锈钢网筛分离得到肾小管、后用胶原酶消化，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肾小管上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔肾小管上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肾小管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠母亲DDP同源物6(Smad6)elisa试剂盒 | XWLC-05云南宣威人肺腺癌细胞系 |
大鼠非磷酸化细胞信号转导分子(SMAD-3)elisa试剂盒 | 小鼠胸腺上皮细胞 |
大鼠非磷酸化细胞信号转导分子(SMAD-2)elisa试剂盒 | 小鼠肾小球系膜细胞 |
大鼠横纹肌辅肌动蛋白α(smActinin-α)elisa试剂盒 | PC-61 (小鼠杂交瘤细胞CD25) |
大鼠V型胶原蛋白酶(Colase V)elisa试剂盒 | 人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299(STR鉴定正确) |
大鼠X框结合蛋白(XBP1)elisa试剂盒 | 小鼠胸腺细胞 |
猪免疫抑制酸性蛋白（IAP）elisa试剂盒 | 大鼠原代腹腔主动脉平滑肌细胞 |
SK-BR-3人乳腺癌细胞专用培养基 | PHEX基因过表达细胞株 |
MM.1R人多发性骨髓瘤细胞专用培养基 | CSPG5基因过表达细胞株 |
人原代颌下腺囊肿细胞专用培养基 | DTX3基因过表达细胞株 |
大鼠原代肝外胆管上皮细胞专用培养基 | ZNF711基因过表达细胞株 |
人原代尾椎肿瘤细胞专用培养基 | ATG4C基因过表达细胞株 |
兔肾小管上皮细胞SCC-4细胞专用培养基 | RSPH6A基因过表达细胞株 |
大鼠原代主动脉外膜成纤维细胞专用培养基 | CHRNB2基因过表达细胞株 |
倒置显微镜观察兔肾小管上皮细胞，汇合 75‑80% 执行传代，上皮多边形形态，无污染，吸除瓶内旧培养基。
无菌 PBS 缓冲液漂洗细胞贴壁层 2 次，缓慢摇晃培养瓶去除代谢废物，漂洗完成彻底吸净 PBS。
预热胰酶消化液加入瓶内覆盖细胞，37℃CO₂培养箱消化 2‑4min，镜下细胞变圆、细胞簇散开，立刻终止消化，肾小管上皮不耐长时间消化。
加入肾小管上皮完全培养基中和胰酶，温和吹打瓶壁，剥离细胞，减少机械损伤。
细胞悬液移入无菌离心管，1000r/min 离心 5min，离心结束，小心吸弃上清，保留细胞沉淀。
专用肾小管上皮完全培养基重悬沉淀，混匀计数，接种至新无菌培养容器。
轻轻摇匀细胞，放置 37℃、5% CO₂培养箱，24h 观察贴壁，每 2‑3 天更换培养基，不可培养至完全满板。
