产品名称 | 兔胚胎成纤维细胞 | 组织来源 | 胚胎组织 |
英文名称 | Rabbit Embryonic Fibroblasts | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3720 |
方法简介 实验室分离的兔胚胎成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔胚胎成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔胚胎成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔胚胎成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠P物质(SP)elisa试剂盒 | SNU-354肝癌 |
大鼠性别决定区Y框蛋白2(SOX-2)elisa试剂盒 | 兔骨膜干细胞 |
大鼠琥珀酸氧化酶(SOX)elisa试剂盒 | 兔软骨细胞 |
大鼠分拣蛋白1(SORT1)elisa试剂盒 | 人直肠黏膜上皮细胞 |
大鼠Toll样受体3(TLR3)elisa试剂盒 | 人结直肠腺癌细胞NCI-H716(STR鉴定正确) |
大鼠Toll样受体6(TLR6)elisa试剂盒 | 人神经胶质细胞 |
猪尼克酰胺-N-甲基转移酶（NNMT）elisa试剂盒 | 人原代肝内胆管上皮细胞 |
NCI-H2452人间皮瘤细胞专用培养基 | CIART基因过表达细胞株 |
ME-180人子宫颈表皮癌细胞专用培养基 | BSPRY基因过表达细胞株 |
大鼠原代大隐静脉平滑肌细胞专用培养基 | DDI2基因过表达细胞株 |
兔原代口腔黏膜成纤维细胞专用培养基 | PLCD4基因过表达细胞株 |
人原代牙髓干细胞专用培养基 | PTCD1基因过表达细胞株 |
兔胚胎成纤维细胞RL95-2细胞专用培养基 | EBF1基因过表达细胞株 |
兔原代骨细胞专用培养基 | SPPL2C基因过表达细胞株 |
步骤一：高标准无菌实验筹备 针对胚胎细胞敏感性，提前40min完成实验设备、台面、耗材的全方位无菌消杀，所有器械无菌烘干。预热胚胎成纤维细胞专用完全培养基、无菌PBS、0.25%胰酶消化液，校准培养箱温湿度与CO₂浓度，搭建超洁净实验体系。
步骤二：兔胚胎全身结缔组织取材 无菌摘取兔胚胎，剔除胚胎头部、内脏、骨骼组织，仅保留胚胎躯干疏松结缔组织，该组织为胚胎成纤维细胞主要富集部位。快速用预冷PBS漂洗组织3次，清除血污与杂质，保留鲜活组织活性。
步骤三：精细剪切与多次净化 将胚胎结缔组织剪碎至0.5mm³超细小组织块，移入离心管，加入足量PBS轻柔吹打漂洗4次，每次静置弃上清，彻底去除组织碎屑、游离血细胞，高度纯化靶组织。
步骤四：恒温梯度酶解消化 加入预热胰酶消化液，37℃水浴梯度消化32min，每6min轻柔混匀一次，逐步降解胚胎组织细胞外基质，温和高效解离成纤维细胞，保护胚胎细胞固有活性。
步骤五：终止消化与过滤除杂 消化结束后加入完全培养基终止消化，轻柔吹打混匀释放细胞。100目细胞筛过滤，截留未消化组织残片，收集纯净胚胎成纤维细胞悬液。
步骤六：离心沉淀与均匀重悬 1000r/min室温离心10min，富集细胞沉淀，小心吸弃上清，加入2mL预热培养基，轻柔吹打重悬，彻底打散细胞团，制备均匀单细胞悬液。
步骤七：接种培养与增殖管护 将细胞悬液接种至培养瓶，补足培养基摇匀，放入37℃、5%CO₂恒温培养箱静置培养。24h贴壁稳定，胚胎细胞增殖速度较快，每2-3天更换新鲜培养基，及时观察细胞形态与增殖密度。
