产品名称 | 兔骨骼肌成纤维细胞 | 组织来源 | 骨骼肌组织 |
英文名称 | Rabbit Skeletal Muscle Fibroblasts | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3771 |
方法简介 实验室分离的tu骨骼肌成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来。
质量检测 实验室分离的兔骨骼肌成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔骨骼肌成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔骨骼肌成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠血清素(ST)elisa试剂盒 | HCC-1171非小细胞肺癌 |
大鼠Slingshot同源物(SSH1)elisa试剂盒 | 兔冠状动脉平滑肌细胞 |
大鼠琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)elisa试剂盒 | 小鼠视网膜前体细胞 |
大鼠血钠(SS)elisa试剂盒 | 大鼠肺成纤维细胞 |
大鼠Ras相关蛋白1(Rap1b)elisa试剂盒 | 大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6（种属鉴定） |
大鼠RGD三肽(RGD)elisa试剂盒 | 人卵巢成纤维细胞 |
猪鞘磷脂（sphingomyelin）elisa试剂盒 | 小鼠原代脑血管周细胞 |
BHK-21(C-13)仓鼠肾成纤维细胞专用培养基 | GABRA1基因过表达细胞株 |
LOVO/5FU人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株细胞专用培养基 | ARID3B基因过表达细胞株 |
人原代胎盘绒毛膜间质细胞专用培养基 | TTLL10基因过表达细胞株 |
人原代呼吸道上皮细胞专用培养基 | GLIS2基因过表达细胞株 |
人原代子宫蜕膜基质细胞专用培养基 | DMRT1基因过表达细胞株 |
兔骨骼肌成纤维细胞PANC03.27细胞专用培养基 | ARHGAP44基因过表达细胞株 |
小鼠原代胰岛细胞专用培养基 | BTN2A2基因过表达细胞株 |
实验准备：超净工作台紫外灭菌 30min，37℃水浴预热骨骼肌成纤维细胞完全培养基、PBS 缓冲液、胰酶消化液；T25 培养瓶加入 5mL 完全培养基，置于 37℃5% CO₂培养箱预平衡 15min，整理无菌耗材。
细胞复苏融化：从液氮取出兔骨骼肌成纤维细胞冻存管，放入 37℃水浴快速摇晃融化，融化时间控制在 2min 以内；冻存管外壁喷洒 75% 酒精消毒，移入超净台。
去除冻存保护剂：将冻存管内细胞悬液转移至装有 4mL 预热完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀；1000r/min 离心 5min，小心吸弃上清冻存液，保留底部细胞沉淀。
铺板接种细胞：加入 2‑3mL 完全培养基，吹打重悬细胞沉淀；将细胞悬液全部转移至预平衡 T25 培养瓶，十字方向轻摇培养瓶，让细胞均匀铺板，平稳放入培养箱静置 24h，不晃动瓶体。
细胞换液维护：24h 后显微镜观察细胞贴壁情况，弃去悬浮死细胞与碎片，更换 5mL 新鲜完全培养基；骨骼肌来源成纤维细胞增殖旺盛，后续每 2‑3 天更换培养基。
传代扩增操作：细胞汇合度 85%‑90% 开展传代；弃旧培养基，PBS 清洗细胞 2 次；加入胰酶消化，镜下细胞变圆收缩，加入完全培养基终止消化；收集细胞悬液离心，按 1:2~1:3 分瓶接种，补加培养基继续培养。
细胞应用冻存：细胞达到实验密度，用于肌肉纤维化、组织重构相关体外研究；保种时收集细胞沉淀，加入冻存液分装冻存管，程序降温后液氮长期保存；注意避免细胞过度长满，防止细胞衰老。
