兔Ⅱ型肺泡上皮细胞

兔Ⅱ型肺泡上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对新西兰大白兔的Ⅱ型肺泡上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征，并经 RT-qPCR 验证上皮标志基因表达水平⁠⁠

产品名称：兔Ⅱ型肺泡上皮细胞

英文名称： Rabbit Type II Alveolar Epithelial Cells

组织来源： 肺组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔Ⅱ型肺泡上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔Ⅱ型肺泡上皮细胞经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔Ⅱ型肺泡上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

镜检细胞汇合 75‑80%，吸出废旧培养基，上皮细胞禁止过度长满。

无菌 PBS 清洗细胞层 2 次，吸除 PBS 废液。

肺泡上皮专用消化液加入培养瓶，37℃消化 4‑7min，观察细胞变圆。

兔 Ⅱ 型肺泡上皮完全培养基终止消化，温和吹打得到细胞悬液。

悬液转移离心管，900rpm 离心 5min，弃上清。

肺泡上皮专用完全培养基重悬沉淀，按密度接种新器皿。

37℃、5% CO₂培养箱静置，48h 观察贴壁，2‑3 天更换培养基。

1.取材过程中需保持组织湿润和低温，血管组织离体后超过30分钟会导致内皮细胞活力明显下降。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞体外可传10-15代，建议采用低代次细胞进行实验，高代次细胞可能出现表型漂移和凝集素摄取能力下降。

4.培养基中需添加EGM-2内皮细胞生长添加剂套装，包含VEGF、FGF-b、EGF和hydrocortisone等关键生长因子。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。