人视网膜色素上皮细胞

人视网膜色素上皮细胞

基于组织块贴壁法从健康供体的视网膜色素上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：人视网膜色素上皮细胞

英文名称： Human Retinal Pigment Epithelial Cells

组织来源： 视网膜组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人视网膜色素上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人视网膜色素上皮细胞经S-100免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人视网膜色素上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶

人视网膜色素上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存管取出，37℃水浴快速复融，酒精消毒冻存管外壁，移入超净台。

细胞悬液转移离心管，RPE 细胞完全培养基稀释冻存保护剂。

1200rpm 离心 5min，小心弃上清，不要打散细胞沉淀。

加入完全培养基，轻柔吹打重悬细胞。

细胞计数，调整接种密度，接种包被培养器皿。

37℃，5% CO₂培养箱静置孵育。

24h 镜检贴壁，更换培养基，汇合 70‑80% 传代。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.使用人源组织标本需获得伦理委员会批准及患者知情同意，操作需符合生物安全规范。 建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。