人脑微血管内皮细胞

人脑微血管内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从健康供体的脑微血管内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：人脑微血管内皮细胞

英文名称： Human Brain Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 大脑皮质组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人脑微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人脑微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 人脑微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人脑微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

培养瓶预处理：实验前用快速包被液处理T25培养瓶，加入2mL包被液完全覆盖培养底面，室温静置5min，吸弃包被液，无需过夜风干，直接备用，构建适配内皮细胞的贴壁基质。

细胞复苏纯化：冻存细胞37℃快速融化后，移入含内皮细胞完全培养基的离心管，轻柔混匀，400g离心10min，通过低速梯度离心去除细胞碎片与杂细胞，提升细胞纯度。

精准接种培养：纯化后的细胞用专用培养基重悬，调整密度为3×10⁵个/mL，接种于预处理的培养瓶中，37℃、5%CO₂培养，初期静置48h禁止移动培养瓶，保障细胞贴壁成型。

阶段性换液：接种48h后首次半量换液，保留半数原有培养基维持细胞微环境，后续每24h全量换液一次，严格去除悬浮杂质，适配内皮细胞高代谢特性。

短时温和消化：细胞融合至90%以上传代，PBS清洗后，加入微量胰酶-EDTA，37℃精准消化60-90s，镜下细胞轻微脱壁即终止消化，避免过度消化损伤内皮细胞屏障结构。

屏障功能检测：培养3-5天后，通过Transwell小室检测细胞跨膜电阻，验证血脑屏障模型活性，电阻值稳定后即可用于后续实验。

低温冻存管控：对数生长期细胞收集后，用含血清专用冻存液重悬，细胞密度控制为8×10⁵个/管，程序降温4℃30min、-20℃1h、-80℃过夜，次日转入液氮。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。