产品名称 | 人毛囊干细胞 | 组织来源 | 毛囊组织 |
英文名称 | Human Hair Follicle Stem Cells | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3366 |
方法简介 实验室分离的人毛囊干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化制备而来。
质量检测 实验室分离的人毛囊干细胞经CK19或CD200免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 人毛囊干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人毛囊干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、I/II型胶原酶、DNase I、M199培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠组织型纤溶酶原激活物抑制剂1(t-PA1)elisa试剂盒 | NCI-H524人非小细胞肺癌细胞 |
大鼠胸腺五肽(TP-5)elisa试剂盒 | 大鼠嗅球神经干细胞 |
大鼠总蛋白(TP)elisa试剂盒 | 大鼠脑膜细胞 |
大鼠泰勒虫表面蛋白(ToSp)elisa试剂盒 | KTC-1 (人甲状腺癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠GATA结合蛋白2(GATA2)elisa试剂盒 | 人乳腺癌细胞MDA-MB-361(STR鉴定正确) |
大鼠GATA结合蛋白4(GATA4)elisa试剂盒 | 羊睾丸支持细胞 |
猪微管相关蛋白轻链3II（LC3II）elisa试剂盒 | 兔原代视网膜色素上皮细胞 |
Nthy-ori 3-1人甲状腺正常细胞专用培养基 | SLCO4C1基因过表达细胞株 |
RAW 264.7小鼠单核巨噬白血病细胞专用培养基 | FOXA3基因过表达细胞株 |
小鼠原代海马神经干细胞专用培养基 | PTPRE基因过表达细胞株 |
D341Med细胞专用培养基 | GABRG3基因过表达细胞株 |
人阴道成纤维细胞永生化细胞专用培养基 | JPH3基因过表达细胞株 |
人毛囊干细胞大鼠原代股动脉内皮细胞专用培养基 | CCNJ基因过表达细胞株 |
DLD-1细胞专用培养基 | ARMH3基因过表达细胞株 |
细胞复苏：毛囊干细胞干性强、增殖缓慢，超温和避光复苏。37℃慢速解冻，消毒后移入干细胞专用无血清培养基，1000rpm离心6min，轻柔重悬，静置48h避光培养。
细胞换液：复苏48h首次半量换液，保留干细胞分泌因子，后续每96h换液一次，低干扰维持干性。
细胞传代：细胞融合度85%传代，干细胞专用温和消化液消化3min，轻柔脱壁，按1:2极低比例传代，严控传代次数。
细胞消化：无损伤消化，避免破坏干细胞干性受体，轻柔吹打，保留干细胞团簇活性，防止分化。
细胞冻存：干细胞专用冻存体系，95%FBS+5%DMSO，细胞密度5×10⁵个/mL，慢速梯度冻存，锁定干性。
细胞接种：低密度接种3×10³个/cm²，适配干细胞干性维持需求，避光静置10h贴壁。
细胞质控：细胞球状、梭形混合形态，干性稳定、无自发分化，增殖缓慢均匀，无菌无污染，适用于毛发再生、干细胞分化研究。
