人角膜内皮细胞

人角膜内皮细胞

从健康供体角膜内皮细胞组织标本经胶原酶-弹性蛋白酶联合消化获取单细胞悬液，通过 Percoll 密度梯度离心纯化内皮细胞组分，接种于纤维连接蛋白预包被的培养皿中，使用内皮基础培养基 supplemented with 多种生长因子（VEGF、FGF-2、IGF-1 及 Ascorbic acid）维持培养；通过免疫荧光染色显示 CD31 膜染色阳性、vWF 胞质颗粒状表达，并结合乙酰化 LDL 荧光摄取实验和内皮管腔形成 assay 综合鉴定。

产品名称：人角膜内皮细胞

英文名称： Human Corneal Endothelial Cells

组织来源： 眼角膜组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人角膜内皮细胞采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人角膜内皮细胞经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 人角膜内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人角膜内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：角膜内皮细胞属于终末分化细胞，增殖能力极弱，复苏全程零损伤操作。37℃水浴快速轻柔解冻，消毒管壁后，缓慢将细胞悬液滴入预热内皮细胞专用高营养培养基，1000rpm低速离心5min，弃上清，极轻柔重悬，避免机械损伤，接种后静置72h不移动。

细胞换液：复苏后72h首次换液，给足细胞贴壁适应时间。后续每96h换液一次，换液时PBS低温轻柔点洗，去除少量漂浮杂质，加入新鲜高营养培养基，维持细胞存活状态，延缓细胞凋亡老化。

细胞传代：仅细胞满壁100%融合后可谨慎传代，内皮细胞增殖能力有限，传代次数严格控制在3代内。弃培养基，PBS润洗2次，低浓度胰酶消化3min，轻柔脱壁后终止消化，按1:5极低比例传代，保证细胞密度满足存活需求。

细胞消化：消化操作极致轻柔，严格控制消化温度与时间，避免损伤终末分化细胞。消化后仅轻敲瓶壁辅助脱落，禁止强力吹打，最大限度保留细胞活性与完整形态，减少细胞凋亡损耗。

细胞冻存：仅选取形态完美、无老化的初代内皮细胞冻存，冻存液采用95%FBS+5%DMSO超高保护体系。细胞密度6×10⁵个/mL，慢速梯度降温，液氮避光密封保存，减少细胞活性流失。

细胞接种：高密度接种保障存活，接种密度2×10⁴个/cm²，内皮细胞依赖高密度细胞间信号维持存活。接种后缓慢摇匀，静置12h待完全贴壁，全程杜绝震荡、挪动。

细胞质控：合格角膜内皮细胞呈多边形鹅卵石形态、排列致密规整、边界清晰，无梭形变异型。细胞无自发凋亡、无空泡老化，无菌无污染，形态功能稳定，适用于角膜内皮病变、屏障功能研究。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。