人肝癌组织源细胞

人肝癌组织源细胞

采用组织块贴壁法从健康供体肿瘤组织标本中分离癌组织源细胞，经机械剪碎后与胶原酶 IV、透明质酸酶和 DNAse I 联合消化 2-4h，通过 Percoll 密度梯度离心去除坏死组织和红细胞，将肿瘤细胞接种于含 20% FBS 的 DMEM/F12 完全培养基中培养；通过形态学观察（细胞多形性、核质比增高、锚定非依赖性生长）和免疫荧光检测肿瘤标志物（如 CK7、CK19、CEA 等组织特异性标志）验证恶性表型，并经 Ki-67 增殖指数检测和动物成瘤实验确认肿瘤细胞活性与致瘤性。

产品名称：人肝癌组织源细胞

英文名称： Human Hepatoma Tissue-Derived Cells

组织来源： 肝癌组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的癌组织源细胞采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来。

质量检测  实验室分离的人肝癌组织源细胞经BCRP鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 人肝癌组织源细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人肝癌组织源细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

手术新鲜肝癌病灶组织，无菌 PBS 含青霉素链霉素反复冲洗，剔除正常肝组织、包膜、血块。

剪碎组织至 0.5mm³，Ⅱ 型胶原酶 37℃震荡消化 120min，分次收集肿瘤细胞悬液。

培养基终止消化，70μm 筛过滤，1300r/min 离心 8min 收集肝癌细胞沉淀。

肿瘤细胞专用高糖完全培养基重悬，调整细胞密度 6×10⁵个 /cm² 接种。

培养箱静置 72h 首次换液，清除坏死肿瘤碎片、浸润免疫细胞。

细胞融合 85% 传代，缩短胰酶消化时间，降低肿瘤细胞凋亡率。

仅使用 P2-P5 代细胞，高代次易发生肿瘤细胞恶性表型丢失。

1.手术获取组织后需立即在显微镜下剥离平滑肌层，避免成纤维细胞等杂细胞过度污染。

2.常规培养皿经PBS冲洗后即可使用，平滑肌细胞具有较强的自主贴壁能力。

3.该细胞体外传代能力较强，建议3-5代内使用，过高代次可能导致收缩表型标志物表达下降。

4.在DMEM培养基中补充10-20%FBS及1%青霉素-链霉素即可满足生长需求，必要时添加10ng/ml EGF。

5.培养期间每48小时换液，若发现细胞由梭形变为多角形可能提示表型转换，需调整实验时间窗。