人Ⅱ型肺泡上皮细胞

人Ⅱ型肺泡上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对健康供体的Ⅱ型肺泡上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征，并经 RT-qPCR 验证上皮标志基因表达水平

产品名称：人Ⅱ型肺泡上皮细胞

英文名称： Human Type II Alveolar Epithelial Cells

组织来源： 肺组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人Ⅱ型肺泡上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人Ⅱ型肺泡上皮细胞经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人Ⅱ型肺泡上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

标本无菌处理：人肺组织标本预冷双抗 PBS 灌洗肺泡腔，清除血液与痰液

弹性蛋白酶消化：37℃恒温消化肺组织块，释放肺泡上皮细胞团

负选纯化：免疫磁珠去除肺成纤维、内皮杂细胞，富集 Ⅱ 型肺泡上皮

肺泡专用培养：添加肺上皮生长因子、氢化可的松维持细胞表型

肺泡成熟诱导：融合 70% 更换分化培养基，促进板层小体表达

损伤造模：建立缺氧 / 脂多糖诱导肺泡上皮损伤模型，分组给药干预

冻存质控：SP-A 免疫荧光鉴定阳性后，梯度降温冻存，严控传代次数

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞增殖迅速，原代培养2-3周可获得足够细胞，传代后可维持培养15-20代左右。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。