产品名称 | 鸡气管上皮细胞 | 组织来源 | 气管组织 |
英文名称 | Chicken Tracheal Epithelial Cells | 种属 | 三黄鸡 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2724 |
方法简介 实验室分离的鸡气管上皮细胞采用中性蛋白酶-连酶蛋白酶混合消化法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡气管上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 鸡气管上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
鸡气管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SPF级鸡胚(E10-E12)，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、胶原酶、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠促吞噬肽(Tuftsin)elisa试剂盒 | kyse30人食道癌细胞 |
大鼠微管蛋白α3C(TUBA3C)elisa试剂盒 | 大鼠子宫成纤维细胞 |
大鼠肌联蛋白(TTN)elisa试剂盒 | 大鼠甲状旁腺细胞 |
大鼠甲状腺转录因子1(TTF1)elisa试剂盒 | MCF 10A (人正常乳腺上皮细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠CD40配体(CD40L)elisa试剂盒 | 小鼠肝癌H22（种属鉴定） |
大鼠CD45分子(CD45)elisa试剂盒 | 山羊卵巢颗粒细胞 |
猪线粒体呼吸链复合物I（COX I）elisa试剂盒 | 人原代脾脏单核细胞 |
RM-1+LUC小鼠前列腺癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | ADRA2B基因过表达细胞株 |
ID8小鼠卵巢上皮癌细胞专用培养基 | CAVIN4基因过表达细胞株 |
兔原代肌源干细胞专用培养基 | GCM1基因过表达细胞株 |
BT-474细胞专用培养基 | C2CD2L基因过表达细胞株 |
人原代宫颈平滑肌细胞专用培养基 | GLP1R基因过表达细胞株 |
鸡气管上皮细胞WSU-HN6细胞专用培养基 | GRHL1基因过表达细胞株 |
C17.2细胞专用培养基 | LHCGR基因过表达细胞株 |
组织取材消毒：无菌剥离鸡气管段，预冷含双抗 PBS 冲洗内腔黏液、血细胞
黏膜剥离：显微镊子轻柔刮取气管内侧上皮层，避免夹带底层成纤维组织
选择性消化：专用上皮消化液 4℃冷消化过夜，温和吹打剥离上皮单细胞
差速贴壁纯化：悬液转移无包被培养皿静置 30min，弃贴壁成纤维杂细胞上清
上皮专用培养：上清接种胶原 IV 包被板，添加上皮细胞生长添加剂培养
屏障诱导：融合 80% 更换气液界面培养基，构建气管上皮屏障模型
样本收集：收细胞上清 / 细胞沉淀用于检测，剩余细胞梯度冻存备用
