大鼠胰腺星状细胞

方法简介  实验室分离的大鼠胰腺星状细胞采用胶原酶制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠胰腺星状细胞经α-SMA或Desmin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠胰腺星状细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠胰腺星状细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前置准备

实验动物：SD大鼠，取胰腺/睾丸/肾上腺等内分泌腺体

试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS

分离纯化步骤

取实验动物目标内分泌腺体组织，仔细去除周围结缔组织

剪碎组织后采用胶原酶消化法(37度、45-60分钟)分散细胞

经滤网过滤后，采用密度梯度离心纯化目标细胞

胰岛细胞可采用Handy solution差速沉淀法进一步纯化

原代培养要点

胰岛beta细胞：使用CMRL-1640+10%FBS+10mM HEPES+50uM beta-巯基乙醇

睾丸间质细胞：使用DMEM/F12+10%FBS+0.1% BSA培养

肾上腺皮质细胞：使用DMEM/F12+5%FBS+0.1uM地塞米松培养

常见问题优化

胰岛细胞纯度不高：采用Handy solution梯度离心可获得纯度>90%的胰岛细胞

内分泌细胞功能维持：添加相应激素(如IGF-1、IGF-2)可维持细胞功能

细胞存活率低：培养基中添加抗坏血酸和转铁蛋白可提高存活率

大鼠胰腺组织剪碎后，用密度梯度离心结合酶消化法分离胰腺星状细胞，去除腺泡与胰岛。

刚分离静息态星状细胞胞内富含脂滴，接种普通培养瓶后在培养基中自发活化。

活化后细胞转变为梭形，开始表达 α-SMA 纤维化标志物，每 3 天更换一次完全培养基。

待细胞汇合度 80% 进行传代，活化后的星状细胞增殖速度明显加快。

可添加 TGF-β 刺激诱导胶原大量分泌，构建胰腺纤维化体外模型。

传代过程避免过度消化，防止脂滴破碎释放毒性物质。

冻存活化态星状细胞复苏稳定性好，可反复用于抗纤维化药物筛选实验。