大鼠胰腺星状细胞 新品

大鼠胰腺星状细胞

产品信息：

产品名称 大鼠胰腺星状细胞

组织来源 胰腺组织
种属 大鼠

产品规格 5×10^5Cells/T25

培养信息：

方法简介：实验室分离的大鼠胰腺星状细胞采用胶原酶制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的大鼠胰腺星状细胞经α-SMA或Desmin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品名称：大鼠胰腺星状细胞

英文简称：PSCs

组织来源：胰腺组织

产品规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%胰蛋白酶大鼠胰腺星状细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞简介 ：

大鼠胰腺星状细胞分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌生长抑素，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。纤维化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星状细胞(PSC)是胰腺纤维化的主要效应细胞，PSC分离和成功培养是体外研究胰腺纤维化的重要前提。未活性化的PSC胞浆中富含维A脂滴，并表达Desmin蛋白，活化后的PSC则表达α-平滑肌肌动蛋白(alpha-SMA)。PSC具有静息态与激活态两种，并分别具有特异的标志物。静息状态PSC胞质内富含的维生素A脂滴可以被油红O染成红色，阳性表达Desmin。激活状态PSC阳性表达alpha-SMA。油红O染色发现，原代分离的细胞培养6d，胞浆中仍可见明显的脂滴，传代后，橙红色的脂滴颗粒显著减少甚至消失。免疫细胞化学染色显示，细胞接种24h仍然表达Desmin，48h后Desmin基本不再表达。培养48h后绝大多数细胞开始表达alpha-SMA，随着培养时间的增长和传代次数的增加，细胞表达alpha-SMA，而不再表达Desmin，说明细胞活化。提示PSC接种24h后即启动了激活过程，至培养第6d大多数细胞激活，传代后细胞处于高度激活状态。原代胰腺星状细胞可作为慢性胰腺炎新药的细胞筛选模型，目前研究发现：胰腺受损时，在各种刺激因子作用下使胰腺星状细胞活化，导致细胞形态：、功能发生变化，促使基质增生、胶原蛋白的大量生成及不规则沉积。
原代细胞分离：

组织取材

无菌操作是底线：取材前对动物/组织进行严格消毒，全程在超净台内操作，所有工具提前灭菌

新鲜度决定活性：取材后立即放入预冷的含双抗的PBS中，30分钟内完成分离，若无法即时处理，可暂存于4℃冰箱（不超过24小时）

精准取材：避开血管、脂肪、结缔组织等非目标组织，比如分离肝细胞时要剔除胆囊，分离神经细胞时要去除脑膜

组织处理

机械法：通过剪碎、研磨、过滤等方式分散组织，适用于结缔组织较少的组织（如肝脏、肾脏），注意力度适中，避免过度研磨损伤细胞

酶解法：根据组织类型选择合适的酶：

胰蛋白酶：适用于消化上皮组织、肝、肾等，浓度0.25%-0.5%，消化时间15-30分钟，37℃

胶原酶：适用于消化结缔组织、脂肪组织、肌肉组织等，浓度0.1%-0.3%，消化时间1-4小时，37℃，可加入EDTA增强效果

透明质酸酶：常与胶原酶联用，消化软骨、滑膜等富含透明质酸的组织

联合法：机械剪碎后再进行酶解，兼顾效率与细胞活性

细胞筛选与纯化

过滤：使用200-400目细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织块

离心：800-1200RPM离心5-8分钟，弃上清后用PBS重洗2-3次，去除细胞碎片和酶液

特异性纯化：使用差速贴壁法（利用不同细胞贴壁速度差异）、密度梯度离心法（如Percoll、Ficoll）、免疫磁珠分选或流式细胞术，获得高纯度目标细胞
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原代细胞实验注意事项：

取材要快、要新鲜、全程无菌

组织离体时间越短越好，冰上操作，减少缺血损伤。

严格控制细胞代数

原代细胞只建议用 P0～P3，代数越高越容易分化、结果越不可靠。

接种密度宁高不低

原代细胞普遍怕稀，太稀不贴壁、不生长、容易凋亡。

消化是关键，宁轻勿重

胰酶 / 胶原酶只消化到细胞变圆就终止，过度消化必死一批。

吹打轻柔，避免机械损伤。

培养基和血清不要随便换批次

血清、基础培养基、添加因子固定厂家固定批次，换批次必须先预实验。

避免频繁折腾细胞

少开培养箱门，不反复观察、不反复拿进拿出，温度、pH 波动对原代杀伤极大。