大鼠胰岛细胞

方法简介  实验室分离的大鼠胰岛细胞采用胶原酶灌注消化法结合密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠胰岛细胞经DTZ染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠胰岛细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠胰岛细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前置准备

实验动物：SD大鼠，取胰腺/睾丸/肾上腺等内分泌腺体

试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS

分离纯化步骤

取实验动物目标内分泌腺体组织，仔细去除周围结缔组织

剪碎组织后采用胶原酶消化法(37度、45-60分钟)分散细胞

经滤网过滤后，采用密度梯度离心纯化目标细胞

胰岛细胞可采用Handy solution差速沉淀法进一步纯化

原代培养要点

胰岛beta细胞：使用CMRL-1640+10%FBS+10mM HEPES+50uM beta-巯基乙醇

睾丸间质细胞：使用DMEM/F12+10%FBS+0.1% BSA培养

肾上腺皮质细胞：使用DMEM/F12+5%FBS+0.1uM地塞米松培养

常见问题优化

胰岛细胞纯度不高：采用Handy solution梯度离心可获得纯度>90%的胰岛细胞

内分泌细胞功能维持：添加相应激素(如IGF-1、IGF-2)可维持细胞功能

细胞存活率低：培养基中添加抗坏血酸和转铁蛋白可提高存活率

大鼠腹腔麻醉后开腹，胆总管逆行注射胶原酶消化液，结扎胆总管末端防止消化液外流。

取下膨胀胰腺置于 37℃水浴振荡消化 15min，终止消化后反复洗涤胰腺组织碎片。

通过 Ficoll 密度梯度离心法分层分离胰岛，弃去下层胰腺外分泌细胞组分。

显微镜下筛选形态圆润、边界清晰的胰岛团块，转移至悬浮培养瓶培养。

每 2 天更换胰岛培养液，观察胰岛完整性，破损胰岛及时丢弃防止释放蛋白酶损伤健康胰岛。

可开展葡萄糖耐受、药物降糖相关检测，无需解离成单细胞，保留胰岛三维结构。

如需长期留存，采用胰岛慢冻程序冻存，复苏后优先检测胰岛素与胰高血糖素整体分泌水平。