大鼠心肌成纤维细胞

大鼠心肌成纤维细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的心肌成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：大鼠心肌成纤维细胞

英文名称： Rat Cardiac Fibroblasts

组织来源： 心脏心室组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠心肌成纤维细胞采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠心肌成纤维细胞经Vimentin/α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠心肌成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠心肌成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

快速摘取大鼠心脏，剪除心房与大血管，仅保留心室心肌组织，预冷缓冲液冲洗血污。

将心室组织剪碎，分次用 0.125% 胰酶分步消化，每次消化 8min 收集上清。

合并多次消化所得细胞悬液，1000rpm 离心 5min，弃上清重悬细胞。

利用成纤维细胞贴壁速度快的特点，差速贴壁 90min 剔除心肌细胞。

更换成纤维细胞培养基，置于恒温培养箱培养，每 2 天更换一次培养液。

镜下观察细胞呈梭形、排列疏松时进行传代操作。

波形蛋白免疫染色鉴定细胞，用于心肌纤维化相关体外造模实验。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。