大鼠肾动脉内皮细胞

大鼠肾动脉内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离Sprague-Dawley大鼠肾动脉内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：大鼠肾动脉内皮细胞

英文名称： Rat Renal Artery Endothelial Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肾动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肾动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠肾动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肾动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

实验准备：配制血管内皮细胞专用无血清培养基，准备无菌精细器械、消化液，预处理培养板，选取大鼠肾动脉血管。

无菌取材：无菌剥离大鼠肾脏完整肾动脉，剔除外围脂肪、结缔组织，预冷PBS漂洗血管内残留血液。

组织处理：轻柔冲洗血管管腔，纵向剪开血管，刮取血管内壁内皮组织，去除血管平滑肌层。

酶解消化：专用内皮消化液37℃温和消化18min，轻柔震荡，释放内皮单细胞。

纯化离心：培养基终止消化，过滤纯化，1200rpm离心5min，收集肾动脉内皮细胞。

接种培养：无血清内皮培养基重悬接种，恒温静置贴壁培养。

常规养护：48h半量换液，每2天换液一次，严格维持内皮细胞形态与纯度，用于血管功能实验。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。