产品名称 | 大鼠尿道上皮细胞 | 组织来源 | 尿道组织 |
英文名称 | Rat Urethral Epithelial Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2941 |
方法简介 实验室分离的大鼠尿道上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠尿道上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠尿道上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠尿道上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员7A(WNT7A)elisa试剂盒 | CTX-TNA2大鼠脑I型星形胶质细胞 |
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员5a(WNT5a)elisa试剂盒 | 人宫颈成纤维细胞 |
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员2(WNT2)elisa试剂盒 | 人乳腺导管上皮细胞 |
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员10A(WNT10A)elisa试剂盒 | MRC-5 (人胚肺细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠6酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)elisa试剂盒 | SV40转染人成骨细胞hFOB1.19(STR鉴定正确) |
大鼠70kDaζ链关联蛋白激酶(zAP70)elisa试剂盒 | 人脑膜细胞 |
猪鱼精蛋白（Protamine）elisa试剂盒 | 人原代主动脉平滑肌细胞 |
SK-NEP-1人肾母瘤细胞专用培养基 | ELAC1基因过表达细胞株 |
RD人横纹肌肉瘤细胞专用培养基 | FER基因过表达细胞株 |
人原代胎盘周细胞专用培养基 | BCO1基因过表达细胞株 |
羊原代卵巢颗粒细胞专用培养基 | CXorf66基因过表达细胞株 |
人原代视网膜muller细胞专用培养基 | GOLGA1基因过表达细胞株 |
大鼠尿道上皮细胞SKM-1细胞专用培养基 | TBC1D12基因过表达细胞株 |
小鼠原代胸腺基质细胞专用培养基 | ATXN1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
外科剪镊、六孔培养板、细胞筛、多聚赖氨酸包被耗材
试剂：无菌 PBS、角质细胞无血清培养基、DispaseⅡ、胰酶
二、取材与预处理
解剖大鼠取出完整尿道组织，剪开尿道管壁，PBS 冲洗管腔分泌物。
修剪尿道外层结缔组织，组织块浸泡 DispaseⅡ4℃消化过夜。
三、细胞分离与消化
剥离表层尿道上皮组织，剪碎后胰酶 37℃消化 15min。
血清终止消化，吹打过筛，离心收集上皮细胞沉淀。
PBS 洗涤 2 次去除消化酶。
四、纯化与接种培养
无血清上皮培养基重悬细胞，接种包被培养板。
24h 首次换液去除漂浮死细胞，2~3d 换液一次。
细胞成片生长后轻柔传代，避免上皮细胞分化凋亡。
