大鼠结肠黏膜上皮细胞

大鼠结肠黏膜上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从Sprague-Dawley大鼠靶组织中分离结肠黏膜上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：大鼠结肠黏膜上皮细胞

英文名称： Rat Colonic Mucosal Epithelial Cells

组织来源： 结肠组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠结肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠结肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠结肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠结肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

器械：解剖剪、弯镊、培养皿、离心管、100 目 + 200 目细胞筛。

试剂：DMEM 高糖培养基、PBS、EDTA 消化液、0.1% 胶原酶 Ⅰ、双抗、D - 葡萄糖。

耗材提前灭菌，配制预冷洗涤 PBS 添加抗生素。

二、取材与预处理

大鼠处死开腹，分离结肠段，结扎两端防止肠内容物渗漏。

剪下结肠组织，预冷 PBS 反复从肠腔内外冲洗，彻底冲净粪便与黏液。

纵向剪开肠管，平铺于培养皿，刮除表面粪便杂质，剪成 2~3cm 肠段。

三、细胞分离与消化

肠段放入 5mM EDTA 预冷溶液，4℃摇床震荡消化 30min，脱落表层上皮。

收集第一次上清，剩余肠组织加入 Ⅰ 型胶原酶 37℃消化 25min。

吹打解离组织，收集细胞悬液，培养基终止消化反应。

四、纯化与接种培养

先后过 100 目、200 目滤网，离心 5min 弃上清，PBS 洗涤两次。

完全培养基重悬细胞，接种于包被多聚赖氨酸的培养板。

培养 6h 首次换液，去除成纤维细胞等杂细胞，后续每 48h 换液。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。