大鼠角膜成纤维细胞

大鼠角膜成纤维细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的角膜成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：大鼠角膜成纤维细胞

英文名称： Rat Corneal Fibroblasts

组织来源： 眼角膜组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠角膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠角膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠角膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠角膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微器械高压灭菌；0.2%Ⅰ 型胶原酶、DMEM 完全培养基、无菌 PBS；200 目细胞筛。

冰盒用于取材保活，培养瓶无菌处理。

二、取材与预处理

分离大鼠角膜组织，机械刮除上皮与内皮细胞层，仅留存透明角膜基质。

PBS 漂洗基质组织，剪切成细小组织碎块。

三、细胞分离与消化

胶原酶 37℃水浴消化 1.5h，间歇吹打。

血清培养基终止酶解，吹打制备单细胞悬液。

滤网过滤除去未消化组织。

四、纯化与接种培养

离心收集细胞沉淀，完全培养基重悬接种培养。

次日换液清除漂浮杂质细胞。

细胞汇合后传代扩增，即为纯化大鼠角膜基质细胞。

1.取材过程中需保持组织湿润和低温，血管组织离体后超过30分钟会导致内皮细胞活力明显下降。

2.使用纤维连接蛋白(10ug/ml)包被培养器皿可显著改善内皮细胞贴壁速度和铺展形态。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.培养基中需添加10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和10ug/ml肝素，促进内皮细胞增殖并维持表型。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。