大鼠骨髓单个核细胞

大鼠骨髓单个核细胞

基于原代组织酶消化法从Sprague-Dawley大鼠骨髓单个核细胞组织标本获取单细胞悬液，经密度梯度离心和免疫磁珠分选（MACS）双重纯化后，接种于 Matrigel 或胶原包被的培养表面，使用优化配方的专用培养基（含 10% FBS、特定细胞因子及添加剂）培养；通过多组学鉴定策略（免疫荧光/流式/转录组）确认细胞身份，并采用功能实验验证其生物学活性。

产品名称：大鼠骨髓单个核细胞

英文名称： Rat Bone Marrow Mononuclear Cells

组织来源： 腿骨髓组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠骨髓单个核细胞采用取骨髓、通过密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠骨髓单个核细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠骨髓单个核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 半贴壁半悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠骨髓单个核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 器械：骨髓穿刺针、手术剪、镊子、15mL 离心管、200 目滤网

2. 试剂：PBS、淋巴细胞分离液（大鼠专用）、α-MEM 基础培养基、双抗

3. 预处理：器械高压灭菌，操作台紫外消毒 30min

二、取材与预处理

1. 大鼠处死后 75% 酒精浸泡，剥离股骨、胫骨，剪去两端骨骺暴露骨髓腔

2. 无菌 PBS 冲洗骨髓腔，反复吹打冲出全部骨髓内容物，制成骨髓悬液

三、细胞分离与消化

1. 骨髓悬液轻柔叠加于等量淋巴细胞分离液上层，保持液面清晰分层

2. 水平离心机 800g 离心 20min，设置慢升慢降程序

3. 离心后液体分为四层，吸取中间白膜层即为单个核细胞

四、纯化与接种培养

1. 吸取白膜层细胞，加入 PBS 稀释，1000r/min 离心 8min 洗涤 2 次

2. 去除上清，基础培养基重悬细胞，计数调整细胞浓度

3. 根据实验需求直接铺板培养或后续诱导分化处理

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.实验选用SD大鼠或Wistar大鼠，年龄和体重需符合实验标准要求。 该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。